24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1976  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

cuining423

新虫 (初入文坛)

[求助] 16s DNA鉴定菌种都做不出来!!!拜托各位大神了 已有6人参与

我做16s菌种鉴定,采用通用引物27/1492,直接把LB平板(上有单菌落)拿去测序公司,两家公司,三次测序。结果都是正向双峰,反向正常。我改怎么办,测试公司一直说我菌不纯,可是都是单菌落了呀。还有什么办法吗?通过反向序列BLAST,大概可能是芽孢杆菌属,。我还能怎么办!!!!要连个载体再去送测序公司吗?各位大神帮帮忙了,实验室分子方面不怎么做,跪谢了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

465663473

铜虫 (小有名气)

菌肯定是纯的,不然反向也会出现双峰。
你的问题是正向引物有两个以上匹配位点,所以正常测序的时候测出套峰。
解决方法:
①TA克隆后测序。
②换其他引物,4F等等,16S通用引物一大把,自己找找吧,最好选3’端没有兼并碱基的引物
③500bp到700bp处在设计一个反向测序引物,两个方向引物测通。
9楼2015-08-17 10:01:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

生态学查建军

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
要不你用试剂盒提取DNA再拿去测序试试看啊,我每次都是提取后再去测序
2楼2015-08-11 11:19:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cuining423

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 生态学查建军 at 2015-08-11 11:19:17
要不你用试剂盒提取DNA再拿去测序试试看啊,我每次都是提取后再去测序

这个我也做过,试剂盒提取,然后送测序。可是正向也是双峰,后来没办法,才送的平板单菌落,结果也是一样
3楼2015-08-11 11:30:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zkysn

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dllchina: 金币+2, 鼓励应助 2015-08-12 16:22:47
再多纯化几次,有时候你肉眼看到的单菌落,但其实有杂菌的,双峰应该就是不纯的问题,芽孢杆菌应该还是挺好做的,纯化几次后挑单菌落液体培养,然后提DNA,做个PCR再去测序
4楼2015-08-11 17:07:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 288求调剂 +12 没有答案_ 2026-04-05 12/600 2026-04-08 00:17 by T可可西里T
[考研] 259求调剂 +5 就爱吃土豆呀呀 2026-04-07 5/250 2026-04-07 22:40 by JourneyLucky
[考研] 生物工程求调剂 +13 喜欢还是不甘心 2026-04-05 13/650 2026-04-07 16:55 by Ecowxq666!
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-04-07 11/550 2026-04-07 15:13 by shdgaomin
[考研] 287求调剂 +3 通信学硕081000 2026-04-03 4/200 2026-04-06 21:03 by going home
[考研] 求调剂到材料 +5 程9915 2026-04-06 5/250 2026-04-06 15:21 by yulian1987
[考研] 308求调剂 +13 倘若起风了呢 2026-04-05 13/650 2026-04-06 14:20 by 蒋皓禹
[考研] 298求调剂 +3 manman511 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:09 by kk112233
[考研] 材料化工306分找合适调剂 +14 沧海轻舟e 2026-04-04 14/700 2026-04-05 09:53 by 朱云虎202
[考研] 一志愿北京化工大学,初试成绩350求调剂 +9 沿岸?贝壳 2026-04-04 14/700 2026-04-05 01:09 by 沿岸?贝壳
[考研] 11408,335分,本科211,求调剂,可转专业 +5 鳄梨大鳄鱼 2026-04-03 5/250 2026-04-04 22:49 by chongya
[考研] 323求调剂 +8 李佳乐1 2026-04-04 8/400 2026-04-04 22:26 by hemengdong
[考研] 材料与化工306分找调剂 +23 沧海轻舟e 2026-04-02 27/1350 2026-04-04 21:52 by laoshidan
[考研] +5 雾与海 2026-04-02 6/300 2026-04-04 19:53 by 蓝云思雨
[考研] 311求调剂 +11 勇敢的小吴 2026-04-02 11/550 2026-04-03 21:46 by qlm5820
[考研] 294求调剂 +6 Grey_Ey 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:46 by 欣喜777
[考研] 兽医调剂 +3 wh119216 2026-04-02 3/150 2026-04-03 19:34 by zrongyan
[考研] 279求调剂 +5 傅文秋 2026-04-02 5/250 2026-04-02 18:10 by 笔落锦州
[考研] 324求调剂 +5 想上学求调 2026-04-01 6/300 2026-04-02 10:16 by sanrepian
[考研] 0710生物学求调剂 +9 manman511 2026-04-01 9/450 2026-04-02 10:00 by zxl830724
信息提示
请填处理意见