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biogefart

木虫 (著名写手)

[交流] 求助快速内切酶原理!

最近MBI推出了5分钟快速内切酶,不知道原理是什么?

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-14 at 10:15 ]
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闹太套
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


xyklmu(金币+1,VIP+0):thanks
反应条件是……?
提高了温度和离子强度?
2楼2008-08-16 00:09:22
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
xyklmu(金币+5,VIP+0):感谢答复,积极交流
从动力学上分析,限切酶对DNA的切割只是个瞬间的过程
从聚合酶完成复杂的合成过程速度(约1Kb/min)可以想象得出(理论上有限切酶单分子实验为证),
限切酶对DNA的扫描、识别、切割也是很快的,通常只需数秒
当然这是在酶和DNA极纯的条件下获得的数据

而在实验过程中真正影响酶切速率的往往是DNA及酶的纯度和质量
以及体系中是否存在杂质(因为它们往往会抑制酶活)

所以提供高质量的DNA及酶就成了完成快速酶切的重要问题
MBI开发的新产品-FastDigest™ 限制性内切酶可以在5分钟内特异地切割DNA分子,是对自己酶质量的一种担保及承诺
意在说明自己的酶纯度高
而另一方面提供高质量的DNA也是重要一环
仔细查阅MBI,公司自己也承认“高质量DNA是快速酶切DNA的关键因素,推荐与MBI公司的GeneJET™ Plasmid Miniprep Kit(Cat#K0501/2/3)配套使用纯化DNA模板”

所以,只要自已能够制备出高质量的DNA,使用高纯度的酶,就完全可以达到快速酶切的效果

(注:DNA的局部结构折叠、修饰……也会影响酶切速度)
3楼2008-08-16 02:16:44
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biogefart

木虫 (著名写手)

两位真是内切酶领域的老大!
闹太套
4楼2008-08-16 08:24:23
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

3楼才是啊~~~
我很弱的……
5楼2008-08-16 08:31:17
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tanche163

捐助贵宾 (正式写手)

NEB的也有,不过不放心,还是多反应点时间呵呵
阳光总在风雨后
6楼2008-08-16 10:09:36
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