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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 酶活性测定
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moneymaker

银虫 (正式写手)

[交流] 求助 酶活性测定

大家好, 测定某微粒体酶活性的时候, 有些文献只是简单低速匀浆后取上清直接测定, 而有些文献则先速匀浆后取上清, 上清再10万g 高速离心沉淀. 沉淀物再用缓冲液悬浮后, 再测定该酶的活性.. 后者提取的是微粒体.

请教大家, 这样做的差别在哪里. 怎么测定同种酶却有不同的提取方法.
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1楼 2008-08-15 14:01:44
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
这样测出来的比活度不同而已
前者能够最大程度保留酶量，但是纯度很低
后者相当于浓缩的过程，纯度高，但肯定会有损失的

根据你的实验要求选择不同的方法吧~~~
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2楼2008-08-15 14:30:27
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★
xyklmu(金币+5,VIP+0):感谢答复，积极交流
收到你的站内信

其实，这两种方法都是粗提取而已，要让比活度上一个数量级，还是得用过柱的方法
简单的粗酶液也是可以测活性的
当然前提是，杂蛋白不会影响反应
如果仅仅需要粗提取，那么两个方法都可以
步骤越少对蛋白的损伤越小，当然纯度也越低
你综合考虑下吧
我感觉这两个方法测得的酶活性应该差不多（我指的是同种方法组内的比较，反正酶活性是你自己定义的……）
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3楼2008-08-15 15:15:59
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
不客气啦~~~~
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4楼2008-08-15 16:15:02
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fruit

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
xyklmu(金币+4,VIP+0):感谢答复，积极交流
这两种方法都可以，按不同的处理也不会有太大影响。
如果你的提取液中没有反应所需的底物，这两种提取方法的结果应该比较接近；如果提取液中含有酶的底物，那么结果就大相径庭。这不难理解。
所以， 按照你提取液中有没有含有酶的底物进行选择，最好的结果：就是用粗提的酶液灭活，在加入底物，进行测定，这样的结果应该是可靠的。
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5楼2008-08-15 21:03:54
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moneymaker

银虫 (正式写手)
楼上的建议 非常有用, 谢谢您
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6楼2008-08-16 09:28:05
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