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蕲螺衣

铜虫 (小有名气)

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虫号: 1924593
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性别: MM
专业: 病原细菌与放线菌生物学

[求助] 比较糟心的蛋白纯化以及分析问题，求解答~ 已有6人参与

不知道有没有人用过GE公司的HiPrepTM 26/60 SephacrylTM S-200纯化柱，柱体积为320ml，我流速用的1.5ml/min，以下是我的出峰位置，不知道有没有经验丰富的同学能根据该出峰位置来判断蛋白的大小的？另外我做的蛋白是两个蛋白（20KD和7KD，PS：两个蛋白结合很稳定，也不是二硫键结合，结合比例未知

）的复合物，从出峰情况可以看出是几聚体吗？是否有游离的20KD的蛋白存在呢？实验室就我一个人做纯化，而且这个蛋白是要送去做结晶的

，但是没有相关经验，希望有经验的虫友能帮忙解答，谢谢！

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1楼 2015-08-07 10:19:14

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bioceanliu

新虫 (小有名气)

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专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

这是个aggregation peak，可以试一下分别表达两个蛋白，如果两个蛋白分单独纯化是很好的soluble的蛋白，混合在一起是聚合的话，就比较有意思了，可能是引发了有序的聚合，也可能是构想改变导致非特异性聚合，目前楼主可以试试换不同的buffer过s200，或者提高盐浓度看看能否打破aggregation

发自小木虫IOS客户端