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米可儿come木虫 (正式写手)
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关于牛血清蛋白浓度测定的问题已有2人参与
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我高分子材料专业的，在做一些抗蛋白吸附的材料，在具有微孔的聚偏氟乙烯膜表面镀上亲水的coating，可以起到抗蛋白吸附的作用。在性能测试的过程中，我配制了1mg/ml 的牛血清蛋白溶液（BSA溶液），并绘制了BSA的标准曲线，用的是紫外分光光度法测的蛋白浓度，波长设置的是280nm。然后我将我测材料放在1mg/ml 的BSA溶液中浸泡并轻微振荡，保持24h，温度为室温 30℃，然后测溶液中蛋白的浓度，但结果发现测得的浓度均大于初始浓度，不是偶然，已经做了很多组实验，目前我排除了多个可能导致吸光度增大的因素，如coating在浸泡过程中有溶出物增加吸光度，和基底材料中溶出物，以及亲水镀层吸水使溶液浓缩，但是这些经实验和论证后均不成立，是不是问题出在蛋白本身上，我查资料BSA保存需冷藏，不知道30℃放置24h会不会导致蛋白变性，变性会导致吸光度增加吗 有对这方面了解的请帮我指点一下，这个问题已经困扰了我很久，接下来的实验不知道该怎么办了 |
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米可儿come
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不好意思啊，最近都没怎么登陆论坛，我做的时候是夏天，室温比较高，一开始总是会出现偏大的现象，后来我就一直在空调房里做，温度大概25度左右，吸附时间两个小时，然后尽快测试，结果比较理想，我也只能解释成是温度高导致蛋白变性，诸如结构破坏，这个测试的原理好像是根据280nm处某个基团的吸收，如果结构破坏，暴露在外面的基团增多，所以吸收值变大，以这个为出发点的话，我首先保证配制溶液的过程中保证水以及容器等干净，不被污染，然后保持环境温度不要太高，测试时间短，仅供参考 发自小木虫Android客户端 |
15楼2015-12-14 18:06:24
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米可儿come: 金币+1 2015-08-11 10:23:14
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6楼2015-08-09 23:37:00
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7楼2015-08-09 23:37:36
米可儿come
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8楼2015-08-11 10:24:31