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xiaokuan4185

铁虫 (初入文坛)

[交流] 求助RNA的提取方法

求助RNA的提取方法
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bluesky
1楼 2008-08-14 21:14:44
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lujing078883

提取RNA

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
1、将组织在液氮中磨成粉末后,再以50-100mg组织加入1ml Trizol液研磨,注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。将研磨液抽提到tube管中。匀浆30秒。
2、        加入200微升氯仿，匀浆30秒。12000转离心5分钟。
3、        将上清液移至新tube管中，加入等体积异丙醇，室温放置5分钟后，12000转离心5分钟。
4、        去除上清液，加入浓度为70%的酒精700微升，12000转离心2分钟。
5、        同上
6、        去除酒精，干燥3至5分钟。
7、        加入40微升DEPC灭菌封口后放入液氮罐保存。
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8楼2008-08-25 09:07:31
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):thx
总RNA提取

材料
1.        Trizol
2.        氯仿
3.        异丙醇
4.        无水乙醇
5.        冷冻(0–4℃) 75%乙醇
6.        DEPC水
方法
1.        按100mg组织/1ml Trizol的量匀浆组织块（或107个细胞/1ml Trizol）。吹打团块裂解细胞，后vortex 30s。贴壁细胞直接在皿中裂解，按1ml Trizol/10 cm2加入Trizol后吹打裂解细胞。转移到小管中vortex 30s
2.        12,000g 4℃离心10min。取上清，室温静置10min。
3.        按每1ml Trizol加0.2ml氯仿的量加入氯仿，剧烈手摇混匀，后室温静置3min。
4.        12,000g 4℃离心15min。取水相到新管。
5.        按每1ml Trizol加0.5ml异丙醇的量加异丙醇，稍vortex，室温静置10min沉淀RNA。12,000g 4℃离心10min。
6.        弃上清，加0.5ml 75%冷冻乙醇洗涤。12,000g 4℃离心5min，移弃乙醇。稍离心富集管壁乙醇，移弃。在空气中干燥3–5 min，用DEPC水重悬RNA。
7.        测OD260/OD280。1.8－2.0时，认为RNA中蛋白或者其他有机物的污染是可以容忍的。当R<1.8时，溶液中蛋白或者其他有机物的污染比较明显。当R>2.2时，说明RNA已经水解成单核酸了。
8.        琼脂糖检验。如果28S和18S条带明亮、清晰、条带锐利，并且28S的亮度在18S条带的两倍以上，我们认为RNA的质量是好。





其中有些离心步骤可以省略，如果是用细胞来提取的话~~~
这个针对的是动物组织和细胞的
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2楼2008-08-14 21:18:48
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菜鸟飞吧

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0): 鼓励一下
呵呵，楼上的已经比较详尽了，操作时注意防止RNase污染，tip和tube用RNase-free的或者用DEPC泡过的
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3楼2008-08-17 12:41:52
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):thx
我们用Axygen的进口管子和枪头
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4楼2008-08-17 14:28:29
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