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xiaokuan4185铁虫 (初入文坛)
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求助RNA的提取方法
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| 求助RNA的提取方法 |
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三磷酸腺苷
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reasonspare(金币+3,VIP+0):thx
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总RNA提取 材料 1. Trizol 2. 氯仿 3. 异丙醇 4. 无水乙醇 5. 冷冻(0–4℃) 75%乙醇 6. DEPC水 方法 1. 按100mg组织/1ml Trizol的量匀浆组织块（或107个细胞/1ml Trizol）。吹打团块裂解细胞，后vortex 30s。贴壁细胞直接在皿中裂解，按1ml Trizol/10 cm2加入Trizol后吹打裂解细胞。转移到小管中vortex 30s 2. 12,000g 4℃离心10min。取上清，室温静置10min。 3. 按每1ml Trizol加0.2ml氯仿的量加入氯仿，剧烈手摇混匀，后室温静置3min。 4. 12,000g 4℃离心15min。取水相到新管。 5. 按每1ml Trizol加0.5ml异丙醇的量加异丙醇，稍vortex，室温静置10min沉淀RNA。12,000g 4℃离心10min。 6. 弃上清，加0.5ml 75%冷冻乙醇洗涤。12,000g 4℃离心5min，移弃乙醇。稍离心富集管壁乙醇，移弃。在空气中干燥3–5 min，用DEPC水重悬RNA。 7. 测OD260/OD280。1.8－2.0时，认为RNA中蛋白或者其他有机物的污染是可以容忍的。当R<1.8时，溶液中蛋白或者其他有机物的污染比较明显。当R>2.2时，说明RNA已经水解成单核酸了。 8. 琼脂糖检验。如果28S和18S条带明亮、清晰、条带锐利，并且28S的亮度在18S条带的两倍以上，我们认为RNA的质量是好。 其中有些离心步骤可以省略，如果是用细胞来提取的话~~~ 这个针对的是动物组织和细胞的 |
2楼2008-08-14 21:18:48
3楼2008-08-17 12:41:52
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我们用Axygen的进口管子和枪头 4楼2008-08-17 14:28:29
5楼2008-08-23 18:00:01
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6楼2008-08-23 19:45:15
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7楼2008-08-24 17:05:55
提取RNA
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xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
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1、将组织在液氮中磨成粉末后,再以50-100mg组织加入1ml Trizol液研磨,注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。将研磨液抽提到tube管中。匀浆30秒。 2、 加入200微升氯仿，匀浆30秒。12000转离心5分钟。 3、 将上清液移至新tube管中，加入等体积异丙醇，室温放置5分钟后，12000转离心5分钟。 4、 去除上清液，加入浓度为70%的酒精700微升，12000转离心2分钟。 5、 同上 6、 去除酒精，干燥3至5分钟。 7、 加入40微升DEPC灭菌封口后放入液氮罐保存。 |
8楼2008-08-25 09:07:31
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