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mtyx

银虫 (小有名气)

[求助] WB抗体稀释 已有7人参与

我想问做WB的一抗和二抗用什么稀释液稀释?
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673643401

铁虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
mtyx: 金币+1, 有帮助 2015-08-06 10:06:50
我们实验室一直用TBST(吐温20  0.1%),效果还不错
2楼2015-08-06 10:01:52
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re-take

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
mtyx: 金币+1, 有帮助 2015-08-06 17:52:33
TBST,第一次做的话可以多设几个梯度比较好
船到桥头自然直
3楼2015-08-06 10:44:12
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lavender_li

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
mtyx: 金币+1, 有帮助 2015-08-06 17:52:45
一般的抗体用PBS-T,磷酸化蛋白的抗体用TBS-T
4楼2015-08-06 13:22:40
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admission

木虫 (著名写手)

用pbst或tbst都可以的吧,我们一般用tbst。之前也做过用直接用封闭液稀释,效果还不错

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2015-08-06 13:59:33
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小雨莎莎

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


mtyx: 金币+1, 有帮助 2015-08-10 00:01:00
我们之前用过TBST配的5%脱脂奶粉来稀释,不过这样的话保存时间不长,尤其对于一抗来说,就很浪费了。后来我们买了碧云天的一抗稀释液,里面有叠氮化钠的,稀释后的一抗能反复用好多次。至于二抗的话,我还是用TBST配的5%的脱脂奶粉来稀释。这个注意,二抗的HRP活性会受叠氮化钠影响,千万不能用一抗稀释液配,其他其实没什么特别的咯~~
6楼2015-08-09 10:44:54
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橙子哥01

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


mtyx: 金币+1, 有帮助 2015-08-10 00:01:16
用TBST稀释的5%的牛奶就行
7楼2015-08-09 21:45:38
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sylar1022

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


mtyx: 金币+1, 有帮助 2015-08-10 00:01:28
封闭液就可以了,敷抗体还能减少非特异

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2015-08-09 21:56:58
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凉若馨昔

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


mtyx: 金币+1 2015-08-22 20:13:40
第一,封闭液(5%牛奶用TBST稀释)第二,TBST直接洗膜。我们实验室每个人选择的方式不同,洗出来的效果差不多,TBST可以多洗几次,每次15~20分钟,洗个三次差不多OK~
不做谁的谁,只做你自己~
9楼2015-08-22 14:17:14
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zlhzlh2015

铜虫 (小有名气)

一抗如果宝贵的话可以购买一抗稀释液,二抗用含5%non-fat milk的TBST即可。
10楼2015-08-23 08:53:11
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