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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白胶问题 已有3人参与

跑蛋白胶，见图，什么情况，求高人指点

蛋白胶问题
图片1.jpg
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
1楼 2015-08-05 11:59:35
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

673643401

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-05 23:03:47
1.样品处理的问题或running burfer的问题
2.看你的Marker也有一点M状，说明胶也有问题。
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2楼2015-08-05 12:07:45
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yywang24

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-05 23:04:03
胶凝固的不太好，导致跑胶时条带弯曲，配好分离胶浓缩胶多放一会儿
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3楼2015-08-05 16:51:55
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彭清LC

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、由marker可以知道你的胶交联度不好，建议调整配方，分离胶凝固的久一点，环境温度尽量高一点；
2、可能是你的缓冲液的问题，缓冲液中是否离子浓度过高与否，对蛋白胶的蛋白条带影响比较大；
3、还有一种可能是你的实验室所在电压不稳造成的，先80V，后120~160V，建议电压不要太高，胶浓度可以适当提高一点。
以上三点只是可能的原因，不排除其他原因，你可以一一去排除验证，希望能帮到你。
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8楼2015-08-07 08:24:52
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普通回帖

戚海清

铜虫 (初入文坛)
混合不均
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努力争取，不言放弃
4楼2015-08-06 09:31:33
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 673643401 at 2015-08-05 12:07:45
1.样品处理的问题或running burfer的问题
2.看你的Marker也有一点M状，说明胶也有问题。

running burfer的问题，比如呢
胶有什么问题，能不能具体点啊
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
5楼2015-08-06 11:22:54
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 戚海清 at 2015-08-06 09:31:33
混合不均

什么混合不均？
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
6楼2015-08-06 11:25:05
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 673643401 at 2015-08-05 12:07:45
1.样品处理的问题或running burfer的问题
2.看你的Marker也有一点M状，说明胶也有问题。

样品每次处理都一样，但是十次差不多一次正常，样品处理有问题的话，为什么会偶尔正常一次呢
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
7楼2015-08-06 11:29:23
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admission

木虫 (著名写手)
很可能是缓冲液的问题，之前遇到过类似的问题。下次缓冲液新配，胶凝固30分钟以上，看看行不行

[ 发自小木虫客户端 ]
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9楼2015-08-07 08:45:59
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hanwei1150

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 彭清LC at 2015-08-07 08:24:52
1、由marker可以知道你的胶交联度不好，建议调整配方，分离胶凝固的久一点，环境温度尽量高一点；
2、可能是你的缓冲液的问题，缓冲液中是否离子浓度过高与否，对蛋白胶的蛋白条带影响比较大；
3、还有一种可能是 ...

您好，感谢解答
1、配方是12%，网上查的，如何调整，过硫酸铵浓度影响大吗
2、缓冲液是指running buffer吧，就是Tris，Glycine和SDS，离子浓度不会高啊
3、电压稳不稳我不知道，但是都是先80V，后120~160V这样跑的，为什么要提高胶浓度啊，提高分辨率吗还是怎么的
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HighdensityfermentationofrecombinantE.coli
10楼2015-08-07 10:28:12
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