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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于复性：GSH/GSSG和二硫键折叠是什么关系？
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xissy

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于复性：GSH/GSSG和二硫键折叠是什么关系？ 已有1人参与

求助！！！
实验室做复性会加入GSH和GSSG，一般比例是GSH/GSSG=10：1，这应该是提供了一个相对还原的环境给蛋白，这个过程一般是4°搅拌过夜。而后透析PBS 2次，如果复性成功的话可以得到蛋白，有时蛋白会沉淀完。

这个GSH和GSSG的加入应该是维持一定的氧还电位，帮助蛋白二硫键的折叠，但是二硫键的折叠应该是在一个相对氧化的环境比较好。所以应该是GSSG>GSH。但是不少资料上看的都是GSH>GSSG

有点搞糊涂了。加入GSH和GSSG的过程是蛋白质折叠的过程吗？还是透析PBS的过程才是折叠的过程。真的晕了。
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1楼 2015-08-05 10:41:58
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xissy

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by imyting at 2015-08-05 11:36:38
这时相当于构建一个氧化还原系统，控制二硫键的形成速度；因为需要蛋白先正确折叠，这样才能在正确的位置形成二硫键；至于你说的GSH浓度高于GSSG这是正常的，加入GSH的目的就是延缓二硫键形成，在你开始复性时可能蛋 ...

这个意思是说真正帮助折叠二硫键的是GSSG，而GSH是延缓的吗？因为我在其他表达系统中，看到在表达过程中就加入GSSG和GSH，其中GSSG>GSH的。和我们平常的比例是相反的，所以我就疑惑了。
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3楼2015-08-05 14:00:00
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xissy: 金币+5 2015-08-05 13:54:47
这时相当于构建一个氧化还原系统，控制二硫键的形成速度；因为需要蛋白先正确折叠，这样才能在正确的位置形成二硫键；至于你说的GSH浓度高于GSSG这是正常的，加入GSH的目的就是延缓二硫键形成，在你开始复性时可能蛋白已经有了错误的二硫键，需要先打开，等蛋白折叠的差不多了更容易形成正确的二硫键。
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悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
2楼2015-08-05 11:36:38
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xissy: 金币+5, 感觉好深奥。加入GSSG/GSH确实提高了可溶的有活性的表达，在其他的开放系统中。就是不明白加了GSSG/GSH的比例是怎么判定的。还是谢谢啦。 2015-08-06 15:15:22
引用回帖:
3楼: Originally posted by xissy at 2015-08-05 14:00:00
这个意思是说真正帮助折叠二硫键的是GSSG，而GSH是延缓的吗？因为我在其他表达系统中，看到在表达过程中就加入GSSG和GSH，其中GSSG>GSH的。和我们平常的比例是相反的，所以我就疑惑了。...

嗯，你说的表达过程中加入GSSG和GSH,我认为如果是可溶表达的话是有意义的，如果是包涵体表达就没什么用了；但是如果是可溶表达的话，内质网中本来就有GSSG，如果是为了促进二硫键形成的话，实在是没有必要，我觉得可能还是想起到一定的延缓左右。
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悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
4楼2015-08-06 11:30:56
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