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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 使用免疫荧光的抗体当做ELISA的抗原包被，发现无法吸附在聚苯乙烯表面
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ttlemon77

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1楼 2015-08-04 17:30:57
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673643401

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ttlemon77: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢您的回帖，可是我的问题还没有解决，所以不能把金币全给您，还是谢谢了！ 2015-08-07 16:57:01
PBS不能当做包被液，包被液：碳酸盐缓冲液，配方：碳酸钠1.59g 碳酸氢钠2.93g，稀释到1L（PH 9.6）
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2楼2015-08-05 08:37:18
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ttlemon77

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3楼2015-08-05 08:48:19
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673643401

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ttlemon77 at 2015-08-05 08:48:19
谢谢您的回答，不过我看论坛里也有提到用PBS做包被液的。http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2325433这个里面提到了很多种。
想问一下，包被液使用不当的话是包被的效果会不好，还是会彻底包被不上呢？...

ELISA绝大部分都是用碳酸盐缓冲液包被的（请跟主流走），PBS或许能包被上（我没试过），但你既不用酶标板，用不用主流包被液，包被效果肯定很差，中途还要多次洗涤，所以结果可想而知
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4楼2015-08-05 09:16:51
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ttlemon77

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5楼2015-08-05 09:46:33
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ttlemon77

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6楼2015-08-07 14:52:52
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铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by ttlemon77 at 2015-08-07 14:52:52
昨天试了一下，用了酶标板，用您推荐的碳酸盐缓冲液，ph9.6，用浓度为20 μg/mL的一抗，4 ℃过夜。之后用30 μg/mL的二抗，37度孵育两个小时，还是没有荧光结果。。。这是不是可以说明是蛋白的种类的问题了呢？...

建议你做阳性对照，如果阳性对照显色了，说明你的elisa没有问题，是你的蛋白原因，如果阳性对照没显色，就有可能是你elisa的原因
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7楼2015-08-07 15:43:17
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ttlemon77

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8楼2015-08-07 16:44:06
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铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by ttlemon77 at 2015-08-07 16:44:06
阳性对照是什么意思呢？是说用显色的方法再做一下吗？我这里做的都是阳性的呀，只不过是荧光的。这些荧光在没冲洗之前是可以看到很强的绿光的，但是冲洗之后就没了。。。...

那就不能用elisa方法检测了。实在帮不了你了，问问其他人吧
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9楼2015-08-07 16:55:12
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ttlemon77

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10楼2015-08-07 16:58:50
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