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feiwen_1987

新虫 (初入文坛)

[求助] 考马斯亮蓝法测蛋白怎么算总体的蛋白质提取率,有公式没,求高人指点已有2人参与

我用考马斯量蓝法测蛋白含量,吸光度测出来后,用制得标准曲线算出来含量,但是怎么算总体的蛋白含量啊,还有怎么算提取率,求高人指点哈
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是水货

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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feiwen_1987(sytucom代发): 金币+1, 感谢应助,希望继续关注楼主回复,谢谢 2015-08-04 09:23:01
feiwen_1987(99503102代发): 金币+4, 谢谢应助,继续加油! 2016-01-12 19:51:07
吸光值结合标曲得出你移取样品中蛋白质含量。你提取之后剩余溶液的体积与刚得到的数值相乘,是你 得到的总蛋白质。用得到的总蛋白质/提取物,提取率按湿样还是干样来计算,需要注明。
2楼2015-08-03 20:02:52
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feiwen_1987

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 是水货 at 2015-08-03 20:02:52
吸光值结合标曲得出你移取样品中蛋白质含量。你提取之后剩余溶液的体积与刚得到的数值相乘,是你 得到的总蛋白质。用得到的总蛋白质/提取物,提取率按湿样还是干样来计算,需要注明。

我的样品是用干样,原料为250g红稗粉,经过酶法提取后的沉淀物即含有蛋白质的沉淀物重量为3.69g,然后,我用考马斯亮蓝法测,取0.01g待测样品配制定容到100ml作为待测样液.按照考马斯亮蓝法操作,取出样品待测液0.5ml,补水至1ml,再加5ml考马斯亮蓝溶液,然后取出200ul加在酶标盘上进行测吸光度,用酶标仪测得的吸光度A值为0.071,标准曲线的线性方程为y=0.0037x+0.0004,按照方程查的蛋白浓度为19.08ug,我想请问,我的3.69g里面总共有多少蛋白质,麻烦一下,因为我要算蛋白质的提取率,所以这个问题一直困扰的我,如果你知道怎么算的话,帮我一下,谢谢。
3楼2015-08-04 10:32:16
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是水货

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by feiwen_1987 at 2015-08-04 10:32:16
我的样品是用干样,原料为250g红稗粉,经过酶法提取后的沉淀物即含有蛋白质的沉淀物重量为3.69g,然后,我用考马斯亮蓝法测,取0.01g待测样品配制定容到100ml作为待测样液.按照考马斯亮蓝法操作,取出样品待测液0. ...

0.2ml含有蛋白质19.08ug。换算到100ml中含有9.54mg,即0.01g含有这么多蛋白质,则3.69g含蛋白质为3.52026g。提取率为95.4%。
4楼2015-08-04 20:04:09
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feiwen_1987

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 是水货 at 2015-08-04 20:04:09
0.2ml含有蛋白质19.08ug。换算到100ml中含有9.54mg,即0.01g含有这么多蛋白质,则3.69g含蛋白质为3.52026g。提取率为95.4%。...

恩,你说的有道理,但是我想再问一下,那个从0.5ml里面取出的200ul待测液得到的吸光度0.071,经过线性方程得到的蛋白浓度是19.08ug/ml,不是蛋白含量19.08ug,这个我表达错了,请问19.08ug/ml这个是不是就是200ul里面的蛋白含量。。。还是说19.08ug/ml是0.5ml里面的蛋白浓度。
5楼2015-08-05 17:58:05
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是水货

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by feiwen_1987 at 2015-08-05 17:58:05
恩,你说的有道理,但是我想再问一下,那个从0.5ml里面取出的200ul待测液得到的吸光度0.071,经过线性方程得到的蛋白浓度是19.08ug/ml,不是蛋白含量19.08ug,这个我表达错了,请问19.08ug/ml这个是不是就是200ul里 ...

是每ml的量,是我算错了因为你用标曲表征出来的就是每ml的量
6楼2015-08-05 19:21:40
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朽木先生

禁虫 (正式写手)

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7楼2015-08-05 23:23:31
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feiwen_1987

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 是水货 at 2015-08-05 19:21:40
是每ml的量,是我算错了因为你用标曲表征出来的就是每ml的量...

没事,还是很感谢你的帮助,谢谢!
8楼2015-08-06 17:22:16
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