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yaoxuechun

金虫 (小有名气)

[求助] 皂苷类化合物代谢研究样品前处理蛋白沉淀 已有1人参与

我是做细胞实验的,想用高效液相检测一下拟人参皂苷在细胞内的含量。样品前处理这部分不太懂,请大家给个意见,最好是具体点的处理步骤。
重点:该用哪种试剂既能沉降蛋白,又不会影响到皂苷类化合物的结构?我的化合物是奥克梯隆型三萜皂苷。
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零余子

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yaoxuechun: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢,很有帮助。 2015-08-07 22:21:40
这个啊,你应该有它的结构吧,一般来说酸稳定的话,可以用酸沉淀蛋白,8000转离心,取上清然后有机溶剂萃取(常用乙酸乙酯)吹干,复溶,12000转离心,上清进样。还有一种常用方法就是加甲醇、乙腈等有机溶剂沉蛋白,直接离心,取上清进样,这种方法内源性物质会多一些,但操作简单
努力就是屁股粘在椅子上
2楼2015-08-04 16:32:06
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yaoxuechun

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 零余子 at 2015-08-04 16:32:06
这个啊,你应该有它的结构吧,一般来说酸稳定的话,可以用酸沉淀蛋白,8000转离心,取上清然后有机溶剂萃取(常用乙酸乙酯)吹干,复溶,12000转离心,上清进样。还有一种常用方法就是加甲醇、乙腈等有机溶剂沉蛋白 ...

加甲醇沉蛋白后不需要再萃取什么的,离心后直接进样就可以了是吗?离心也是12000转吗,大约离心多久呢?
3楼2015-08-07 22:25:59
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