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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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bla2013

新虫 (初入文坛)

[交流] 1062bp的cDNA中间的一段总是克隆不出来 已有3人参与

Atggccgcggagctggcgatgggcgccgagctgcccagcagcccgctggccatcgagtacgtcaacgacttcgacctgatgaagttcgaggtgaagaaggagcctcccgaggccgagcgcttctgccaccgcctgccgccaggctcgctgtcctcgacgccgctcagcacgccctgctcctccgtgccctcctcgcccagcttctgcgcgcccagcccgggcaccggcggcggcggcggcgcggggggcggcggcggctcgtctcaggccgggggcgcccccgggccgccgagcgggggccccggcgccgtcgggggcacctcggggaagccggcgctggaggatctgtactggatgagcggctaccagcatcacctcaaccccgaggcgctcaacctgacgcccgaggacgcggtggaggcgctcatcggcagcggccaccacggcgcgcaccacggcgcgcaccacccggcggccgccgcagcctacgaggctttccgcggcccgggcttcgcgggcggcggcggagcggacgacatgggcgccggccaccaccacggcgcgcaccacgccgcccaccatcaccacgccgcccaccaccaccaccaccaccaccaccaccatggcggcgcgggacacggcggtggcgcgggccaccacgtgcgcctggaggagcgcttctccgacgaccagctggtgtccatgtcggtgcgcgagctgaaccggcagctccgcggcttcagcaaggaggaggtcatccggctcaagcagaagcggcgcacgctcaagaaccgcggctacgcgcagtcctgccgcttcaagcgggtgcagcagcggcacattctggagagcgagaagtgccaactccagagccaggtggagcagctgaagctggaggtggggcgcctggccaaagagcgggacctgtacaaggagaaatacgagaagctggcgggccggggcggccccgggagcgcgggcggggccggtttcccgcgggagccttcgccgccgcaggccggtcccggcggggccaagggcacggccgacttcttcctgtag

引物F:GCGCggatccATGGCCGCGGAGCTGGCGATG
     R:GCGCactagtctacaggaagaagtcggccgtgc
这个是我想克隆的cDNA序列和引物,但cgggcaccggcggcggcggcggcgcggggggcggcggcggctcgtctcaggccgggggcgcccccgggccgccgagcgggggccccggcgccgtcgggggcacctcggggaagccggcgctggaggatctgtactggatgagcggctaccagcatcacctcaaccccgaggcgctcaacctgacgcccgaggacgcggtggaggcgctcatcggcagcggccaccacggcgcgcaccacggcgcgcaccacccgg这一部分总是克隆不出来,我用的KOD高保真酶,退货温度从55-80度都试过,这个cDNA是在质粒载体上的。我也尝试过质粒线性化后pcr。我不知道是不是形成大的回文结构,求各位大神支招,谢谢!
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bla2013

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2015-08-02 18:07:10
试试用高GC buffer的聚合酶

p出来了,谢谢
8楼2015-08-06 14:46:09
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-02 22:21:21
质粒做过测序验证吗?或者做个酶切验证,可能你的质粒就缺失了。有可能是可变剪切。
2楼2015-08-02 13:13:05
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bla2013

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-08-02 13:13:05
质粒做过测序验证吗?或者做个酶切验证,可能你的质粒就缺失了。有可能是可变剪切。

质粒没问题,测过序了
3楼2015-08-02 17:10:58
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
试试用高GC buffer的聚合酶
4楼2015-08-02 18:07:10
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