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如何得到一段DNA序列的反向序列已有4人参与
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| 求助各位大神，PCR后得到的序列是否具有方向性？方向是由什么来决定的？具体是这样的，我PCR了一段基因序列，但是我现在需要把它颠倒过来，就是变成反向，不是反向互补，因为我需要把它跟另外一个片段反着连接起来，就是本来是ab和cd连接，但是我现在需要把ab和dc连接，有没有人知道该怎么做啊！！！！！！ |
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6楼2015-08-03 10:58:00
【答案】应助回帖
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如果是5'和3'完全颠倒过来（就如同把整个序列左右镜面颠倒那样），那大概就需要重新合成了，PCR恐怕解决不了，不过不明白你为什么要这样做，因为密码子是三个一组的，颠倒过来就没有意义了呀？ 如果说的是让基因换一个方向表达，正义链和反义链互换的同时碱基序列颠倒（把序列180°旋转），那个不用多虑，你的基因片段就可以用，方向是给人看的而已，参考snapgene软件工具栏中的view--flip sequence功能。 至于你说的ab和dc连接，我姑且理解为，你在设计引物时理解错了基因表达的方向，把引物设计反了，基因的末端设计在了启动子一侧，前端设计在了终止子的方向。如果你做的是酶切连接或者无缝克隆，那两端的连接位点是特异的，重新设计引物做一次PCR就好了。 |
7楼2021-01-07 17:08:03