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[求助] 简并引物的退火温度选择

最近用两对对简并引物扩增未知DNA序列片段，上游引物序列都不是简并引物，下游都是简并引物，但是两者之间的Tm值相差太大。
第一对引物A：上游的Tm值为66℃，下游为29℃。
第二对引物B：上游的Tm值为62℃，下游为35℃。
请问我该分别怎么选择退火温度？

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1楼 2015-07-29 22:26:23

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