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zrk25

木虫 (小有名气)

[交流] 测序结果会有不对的时候吗 已有11人参与

今天拿到测序结果,比对发现根本不对,于是做了菌液Pcr发现有自己要的基因的条带,会不会是测序错了?有别的原因吗?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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xrl123

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也是这个问题啊  ,  PCR都是有条带的,而且大小和我目的片段差不多,  然后用通用引物测序,结果不对,不是我的目的基因。但是我酶切条带也是正确的,这是为什么啊
11楼2017-04-14 15:54:22
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
测序出错的可能不大,菌液PCR经常也会出现假阳性,建议你先通过通用引物PCR、酶切等方法排除自己的问题。
2楼2015-07-28 00:33:11
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a86052

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
测序有出现错误的时候,但是一般是个别的突变什么的,很少出现完全不对的情况~正如楼上所言,菌夜PCR假阳性是不可忽视的问题~
3楼2015-07-28 09:04:19
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远望集团

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
既然做菌液Pcr发现有自己要的基因的条带,如果可以的话,把条带切胶回收、纯化,然后以此为模板做PCR,如果是单一的符合大小的条带,拿这个去测序看看。
只要努力,一切皆有可能!更美的风景在那片更高的天空。。。
4楼2015-07-28 10:25:45
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