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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 已知一个基因cDNA全长，6006 bp，想用高保真酶扩增出ORF区，一直扩增不出条带
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whitewave

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

什么RNA标准的抽提过程和电泳检测楼主看下分子克隆应该都能掌握！个人有个地方没有理解清楚：你目标cDNA的引物为什么能用基因组的引物？基因组引物比cDNA长，那么说明它的引物对必然有一个超过这个cDNA的一个头端，就是有一端都跟cDNA模板不结合，你换什么都不行，除了你有基因组污染！楼主想扩开放读码框应该是想研究这个基因的表达，你得用cDNA序列直接做模板重新设计引物，但是你想把整个读码框都一起一次整体扩增出来连载体里，个人觉得不容易，可以多试试。建议是对序列进行分析找出自己最看中的功能区段序列，把这段扩出来再做载体应该容易操作些。祝你好运

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天生我才
11楼2015-07-30 07:15:25
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zwjxyzcl

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

四个字 同源重组 剩下的就看你自己了

[ 发自小木虫客户端 ]
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12楼2015-07-30 08:30:13
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