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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR 问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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gemini64

银虫 (小有名气)

[交流] PCR 问题

做PCR反应在循环结束后要有5-10min延伸反应，目的是让的PCR片段完全延伸。
我要问的是：为什么前面的循环会有延伸不完全的？不是可以根据程序设定每步的时间吗，把前面的时间设好了怎么会有不完全延伸的呢？想不通！！！
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1楼 2008-08-08 01:31:01
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界
★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):斑斑捧场，蓬荜生辉。
在PCR反应的过程中，有一步延伸的过程，一般我们设计的时间都会大于聚合酶合成整个扩增片段所需要的时间的。Taq我们经常按照每分钟1Kb左右来估算。但这是普遍意义来说的，即平均合成速度。但是，在延伸的过程中，并不是一个聚合酶分子从头至尾会把待扩增的片段合成完的，有时候由于一些未知的原因，聚合酶会从模板上脱落的，甚至会在合成的中间某个位置停顿下来。另外，体内的DNA合成或者说DNA复制过程中，也存在着DNA聚合酶的循环，我们所说的dna合成速度，是指所有的酶分子的平均速度。这样以来，等到了下一个循环开始的时候，变性开始，那些未合成完全的片段也因为温度的升高和模板分开了，形成一些不完整的片段，这样的情况在pcr过程的最初几个循环时较少，越是接近pcr的结束时的几个循环越是容易出现，主要是dna聚合酶的活性也逐渐降低了，底物减少，产物增加所致。
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位卑未敢忘忧国。
2楼2008-08-08 06:37:23
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
…………原来已经被抢答了……木有可以补充的了……
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3楼2008-08-08 09:02:12
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果茶所

金虫 (小有名气)
抢答有奖么？
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4楼2008-08-08 09:38:31
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ningluztt

铜虫 (小有名气)

有时候由于一些未知的原因，聚合酶会从模板上脱落的，

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):thx
对于这一说法偶不太赞同，聚合酶从模板上脱落下来，你是指聚合酶在起作用的过程中一直都是处于与DNA紧密结合的状态码？那就是大错特错。聚合酶在聚合的过程中是在与DNA不断的结合与解离的循环往复过程中的。
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5楼2008-09-02 09:37:25
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bbyu007

木虫 (正式写手)
都是高手啊！！！没做过PCR的生物专业新生路过~~~~~~~~~~~~
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我是笨笨鱼~~~
6楼2008-09-04 13:29:53
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qfzhang

银虫 (小有名气)
这个从概率讲更加合理吧，大部分的时候引物和模板结合，然后开始延伸，这个是没有问题的，可是从反应动力学上讲，有的都延伸完了，有的可能才刚刚开始，或者延伸了一半，有的甚至引物和模板刚刚结合呢。所以要留时间，给那些没有走完的，延伸完成。
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7楼2008-09-04 14:21:36
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cicicome

银虫 (小有名气)
这里还有沙发和板凳？好奇特！
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8楼2008-09-04 17:07:43
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wht1211

木虫 (正式写手)
谢谢各位高人,在这我也学习了.
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9楼2008-09-04 17:13:18
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Irene3707

恩 刚开始做PCR
看完以上发言 又多知道了有关PCR的知识
谢谢啊
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10楼2008-09-11 09:01:11
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