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史密斯丹妮

新虫 (初入文坛)

[求助] 细胞免疫 已有1人参与

我做卵母细胞免疫时，目的蛋白应该是在卵母细胞膜上或透明带上表达，抗体结合后应该在卵母细胞膜或透明带上看到较规则的一圈绿色带。但是用共聚焦显微镜观察以后的实验结果是整个卵母细胞面都是绿色，呈现整个一个圆形的绿色平面。希望有高人指点出现这种结果的原因是什么，那些方面需要改进。急需帮助！谢谢！也希望提供一些指甲油封片的技巧。
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1楼 2015-07-21 17:38:02
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HTweiyi

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你有染核吗，
你清洗的干净吗，孵育二抗的时间和温度是不是没有控制好，
指甲油封片的话，在周围边缘涂一点就可以了
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2楼2015-07-23 12:54:28
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HTweiyi

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 史密斯丹妮 at 2015-07-26 19:53:15
是的，我用0.1%曲拉通首先做了通透处理，后来再封闭的。但有的细胞还是完好的。您说卵母细胞那么脆弱，是不是洗涤时间和次数多了对它损伤也比较大？...

这个就不清楚了，你破膜的时候，可以室温下，时间短点，是不是不破膜也可以的，因为膜上都有孔道的
不需要来回洗涤的，只要浸泡几下就可以了
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8楼2015-07-27 08:53:12
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HTweiyi

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个是不是曲拉通把膜破坏的厉害了，你可以试试不破膜
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10楼2015-07-29 10:30:40
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史密斯丹妮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-07-23 12:54:28
你有染核吗，
你清洗的干净吗，孵育二抗的时间和温度是不是没有控制好，
指甲油封片的话，在周围边缘涂一点就可以了

首先很感谢。我染核了。因为卵母细胞比较脆弱，所以洗的时间不是很长。二抗孵育时间很温度最好多少呢？我封片时，抗淬灭剂老是从片子下面跑出来怎么办啊，总是周围油乎乎的。望得到您宝贵的意见和建议。
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3楼2015-07-24 07:17:32
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HTweiyi

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

首先一般二抗的孵育是在37度的情况下，
封片时，可以在片子的周围涂上一层指甲油，四周的边缘就可以，这样的话会可以彻底封住，另外抗猝灭剂不要加的太多
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4楼2015-07-24 08:51:29
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史密斯丹妮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-07-24 08:51:29
首先一般二抗的孵育是在37度的情况下，
封片时，可以在片子的周围涂上一层指甲油，四周的边缘就可以，这样的话会可以彻底封住，另外抗猝灭剂不要加的太多

观察的时候总是一些卵母细胞会长个辫子或者带个尾巴，它们也是绿色的，好像是胞质溢出了，是不是就相当于细胞碎了，是不是抗荧光淬灭剂放少了？另外，您觉得一抗37度孵育一小时和4度过夜有区别吗？谢谢。
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5楼2015-07-24 22:28:49
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HTweiyi

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你是不是用曲拉通破膜了
一抗的孵育，我还是感觉4度过夜比较好，二抗可以37度孵育一小时
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6楼2015-07-26 11:44:26
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史密斯丹妮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-07-26 11:44:26
你是不是用曲拉通破膜了
一抗的孵育，我还是感觉4度过夜比较好，二抗可以37度孵育一小时

是的，我用0.1%曲拉通首先做了通透处理，后来再封闭的。但有的细胞还是完好的。您说卵母细胞那么脆弱，是不是洗涤时间和次数多了对它损伤也比较大？
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7楼2015-07-26 19:53:15
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史密斯丹妮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-07-27 08:53:12
这个就不清楚了，你破膜的时候，可以室温下，时间短点，是不是不破膜也可以的，因为膜上都有孔道的
不需要来回洗涤的，只要浸泡几下就可以了...

麻烦您最后能帮我看看这个实验结果，分析分析原因吗？整个面是绿色的，本来应该只是外面一圈
细胞免疫
20150728_192302.jpg


细胞免疫-1
20150728_192308.jpg


细胞免疫-2
20150728_202331.jpg
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9楼2015-07-28 21:12:48
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