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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC 求助大神！！
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SDour

新虫 (小有名气)

[求助] HPLC 求助大神！！ 已有5人参与

做HPLC时。由于样品较复杂，所以设置的梯度洗脱，，但是发现梯度越缓分离效果越差了呢？？？不应该是梯度越缓分离效果越好么？？？如图，第一张梯度较缓，但是效果不如第二张，两种缓冲溶液分别是水和2M NaCl，不知道咋回事啊？？请大神们多多指教

HPLC   求助大神！！
P50721-160151.jpg


HPLC   求助大神！！-1
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1楼 2015-07-21 17:33:50
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zhongshi0

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
SDour: 金币+5 2015-07-22 15:57:04
SDour: 金币+5 2015-07-27 09:43:55
SDour: 金币+7 2015-07-27 09:44:52
流速减缓，样品在柱子中分离时间延长，样品的（扩散作用）展宽变大，拖尾变大，分离效果变差，并不是你想想的流速越慢，分离越好。都有个范围适用性。
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8楼2015-07-22 10:10:22
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周筠翔

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
对于离子交换色谱，你分析的肝素是以多糖有机阴离子存在你的柱子中。离子交换过程是一个动态平衡过程，不是说样品存在柱子中越久，交换数越多，分离越好。
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生活在于永不放弃
13楼2015-07-22 16:14:22
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
为什么不早说呢？你什么都不说大家自然会默认是反相。
无论离子交换还是反相，都不是梯度越缓就一定分离效果越好。再说这两个图分离效果有区别吗？
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
10楼2015-07-22 10:36:30
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da1234mao

铁虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
SDour: 金币+3 2015-07-23 16:22:53
引用回帖:
2楼: Originally posted by 赈早见琥珀主 at 2015-07-21 17:55:21
我问个题外的问题，水和氯化钠怎么起到缓冲的作用？

氯化钠并不是缓冲效果，离子交换效果啊
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16楼2015-07-23 08:25:36
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普通回帖

赈早见琥珀主

木虫 (正式写手)
我问个题外的问题，水和氯化钠怎么起到缓冲的作用？
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铁甲依然在
2楼2015-07-21 17:55:21
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
同二楼问
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
3楼2015-07-21 18:24:50
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雨梦无声

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
与2楼同问。另外2M你要洗多久柱子。
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4楼2015-07-21 21:22:41
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SDour

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 赈早见琥珀主 at 2015-07-21 17:55:21
我问个题外的问题，水和氯化钠怎么起到缓冲的作用？

我们做的是肝素方面的研究，有文献支持的，以前师姐做过类似的是成功的，只不过我现在自己做，出了问题，想请大家帮忙，问题就是为什么梯度越缓，分离效果越差？？大家遇到过类似情况么？？
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5楼2015-07-22 08:58:41
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SDour

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 雨梦无声 at 2015-07-21 21:22:41
与2楼同问。另外2M你要洗多久柱子。

柱子平衡1小时，主要是我不明白为什么梯度越缓分离效果越差？？
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6楼2015-07-22 09:00:55
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SDour

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by archbishop at 2015-07-21 18:24:50
同二楼问

我主要不明白为什么梯度越缓分离效果越差？？？
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7楼2015-07-22 09:01:45
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zhongshi0

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhongshi0 at 2015-07-22 10:10:22
流速减缓，样品在柱子中分离时间延长，样品的（扩散作用）展宽变大，拖尾变大，分离效果变差，并不是你想想的流速越慢，分离越好。都有个范围适用性。

呵呵，没好好看题目，答歪了
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9楼2015-07-22 10:15:08
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