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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 蛋白纯化
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贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化 已有3人参与

问个问题 蛋白纯化分为变性条件和非变性条件 它们的适用范围是什么 我要纯化可溶性蛋白 需要保持蛋白活性 应该怎么样选择
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1楼 2015-07-21 09:50:28
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 贝努努哈哈 at 2015-07-29 09:42:21
我做的是酶 要测活性 看实验书上写的产生的酸足够使蛋白变性...

那你不要用硫酸铵吧，要达到你说的产生足够的酸，应该会需要大量的铵盐，这样很容易导致蛋白失活。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
8楼2015-07-29 10:04:56
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我个人觉得能不用最好不要用变性条件，想要活性蛋白可以从上游设计和表达条件入手进行可溶性蛋白表达，用变性剂总归是有影响。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
2楼2015-07-21 13:41:01
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贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-21 13:41:01
我个人觉得能不用最好不要用变性条件，想要活性蛋白可以从上游设计和表达条件入手进行可溶性蛋白表达，用变性剂总归是有影响。

我想用硫酸铵沉淀浓缩再透析 透析时NH4+透析速度比硫酸根快 膜内的硫酸根就会和氢离子结合是蛋白质溶液呈酸性 会使蛋白变性吗
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3楼2015-07-27 19:23:37
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 贝努努哈哈 at 2015-07-27 19:23:37
我想用硫酸铵沉淀浓缩再透析 透析时NH4+透析速度比硫酸根快 膜内的硫酸根就会和氢离子结合是蛋白质溶液呈酸性 会使蛋白变性吗...

用硫酸铵不容易引起蛋白质的变性，但需要做一个小试，确定下蛋白质的浓度，PH，盐浓度等。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
4楼2015-07-28 09:04:29
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