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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 蛋白纯化
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贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化 已有3人参与

问个问题 蛋白纯化分为变性条件和非变性条件 它们的适用范围是什么 我要纯化可溶性蛋白 需要保持蛋白活性 应该怎么样选择
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1楼 2015-07-21 09:50:28
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我个人觉得能不用最好不要用变性条件，想要活性蛋白可以从上游设计和表达条件入手进行可溶性蛋白表达，用变性剂总归是有影响。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
2楼2015-07-21 13:41:01
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贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-21 13:41:01
我个人觉得能不用最好不要用变性条件，想要活性蛋白可以从上游设计和表达条件入手进行可溶性蛋白表达，用变性剂总归是有影响。

我想用硫酸铵沉淀浓缩再透析 透析时NH4+透析速度比硫酸根快 膜内的硫酸根就会和氢离子结合是蛋白质溶液呈酸性 会使蛋白变性吗
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3楼2015-07-27 19:23:37
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 贝努努哈哈 at 2015-07-27 19:23:37
我想用硫酸铵沉淀浓缩再透析 透析时NH4+透析速度比硫酸根快 膜内的硫酸根就会和氢离子结合是蛋白质溶液呈酸性 会使蛋白变性吗...

用硫酸铵不容易引起蛋白质的变性，但需要做一个小试，确定下蛋白质的浓度，PH，盐浓度等。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
4楼2015-07-28 09:04:29
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aiaideenen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

询问一家这方面的公司就行了或者交给他们做，做好了把过程什么的发给你
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5楼2015-07-28 13:25:05
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贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by aiaideenen at 2015-07-28 13:25:05
询问一家这方面的公司就行了或者交给他们做，做好了把过程什么的发给你

没经费 有一部分钱是我出的 苦逼
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6楼2015-07-29 09:40:31
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贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-28 09:04:29
用硫酸铵不容易引起蛋白质的变性，但需要做一个小试，确定下蛋白质的浓度，PH，盐浓度等。...

我做的是酶 要测活性 看实验书上写的产生的酸足够使蛋白变性
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7楼2015-07-29 09:42:21
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 贝努努哈哈 at 2015-07-29 09:42:21
我做的是酶 要测活性 看实验书上写的产生的酸足够使蛋白变性...

那你不要用硫酸铵吧，要达到你说的产生足够的酸，应该会需要大量的铵盐，这样很容易导致蛋白失活。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
8楼2015-07-29 10:04:56
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贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-29 10:04:56
那你不要用硫酸铵吧，要达到你说的产生足够的酸，应该会需要大量的铵盐，这样很容易导致蛋白失活。...

不是为了产生足够的酸 就是用来浓缩沉淀 可能会产生大量的酸 影响到活性
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9楼2015-07-29 15:27:54
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

影响到活性的变性方法需要考虑变性后的复性剂是否会对活性带来二次伤害。如果是，那就不要用了。如果不是，变性有利于纯化的过程，只要对活性影响不大，可以接受的话就大胆用吧。
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10楼2015-08-17 16:15:09
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