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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切后连接转化问题，需要灭火T4ligase吗，连接后直接转化可以吗？42度热激转化
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Stridegogogo

捐助贵宾 (小有名气)

小可爱

[求助] 双酶切后连接转化问题，需要灭火T4ligase吗，连接后直接转化可以吗？42度热激转化 已有3人参与

因为我觉得65度灭火会损伤DNA影响转化效率 请大神指点 鄙人菜鸟
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分子克隆与蛋白结晶
1楼 2015-07-20 14:06:37
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小小八八

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-07-21 08:58:16
Stridegogogo: 金币+2 2015-10-20 11:28:52
连接后加入感受态冰浴30min——1h，再42℃热击90s，冰上防止数分钟后就可以直接转化了
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2楼2015-07-20 14:41:55
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杨柳花飘絮

金虫 (初入文坛)

老虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
冰浴30min42°热激90秒

[ ????С??????? ]
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3楼2015-07-21 01:21:58
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uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-07-21 08:58:25
Stridegogogo: 金币+3 2015-10-20 11:28:46
直接转化没问题的，我以前连接转化都是这么做的。
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4楼2015-07-21 08:35:39
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学习之家

新虫 (初入文坛)
连接后可以直接转化，我一直都是这么做的，没有问题的。T4连接酶，不用灭火。
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5楼2015-07-24 11:22:44
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