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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 跑电泳时，marker条带还没全跑开，目标条带还没出现，样品和marker就跑到电泳液离去了
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jiangwenting

新虫 (初入文坛)

[交流] 跑电泳时，marker条带还没全跑开，目标条带还没出现，样品和marker就跑到电泳液离去了 已有2人参与

RT，做WB也快大半年了，从来没出现过这样的情况啊，一般都是分离胶跑了一半marker最末端的绿色条带就出现了，然后就是慢慢等各种条带跑得更开，有利于后续分析。仔细回忆了下，貌似分离胶的浓度也没弄错啊给跪了！这到底是个什么情况啊。。。。
会不会是浓缩胶小于2ml的缘故？但浓缩胶的作用不就是用来压平基线的吗。。。。
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1楼 2015-07-18 17:54:11
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HTweiyi

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
电泳时,可选择冰浴,浓缩胶不只是压平基线,还有将蛋白浓缩的作用,你可以试试增加一点浓缩胶,
或者在浓缩胶的时候用低电压,到分离胶的时候换高电压
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2楼2015-07-20 09:37:38
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
谁说浓缩胶是压平基线的啊，那是水的活。。。
你做的是原核蛋白表达么？样品没有问题么？浓缩胶过少有时会出现你这种情况，当然不排除温度等其他原因，你可以把电压调低一点，跑时间长一点看看。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
3楼2015-07-20 11:04:14
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jiangwenting

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-07-20 09:37:38
电泳时,可选择冰浴,浓缩胶不只是压平基线,还有将蛋白浓缩的作用,你可以试试增加一点浓缩胶,
或者在浓缩胶的时候用低电压,到分离胶的时候换高电压

真真学习到了！谢谢前辈啊~出问题的这次电泳时浓缩胶和分离胶分别定了60V和120V，您看是否合适？弱弱得再问个问题。。电压能设到10啊20啊这么低的值吗？
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4楼2015-07-20 14:15:22
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jiangwenting

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-20 11:04:14
谁说浓缩胶是压平基线的啊，那是水的活。。。
你做的是原核蛋白表达么？样品没有问题么？浓缩胶过少有时会出现你这种情况，当然不排除温度等其他原因，你可以把电压调低一点，跑时间长一点看看。...

水不是用来压平分离胶的嘛？做的是普通的细胞提取蛋白，样品应该是没有问题的，不才也已经提了好多次啦~这次做的是百分之10的分离胶，以前做百分之8、12的都从来没初现过这种状况。
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5楼2015-07-20 14:22:52
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jiangwenting

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-07-20 09:37:38
电泳时,可选择冰浴,浓缩胶不只是压平基线,还有将蛋白浓缩的作用,你可以试试增加一点浓缩胶,
或者在浓缩胶的时候用低电压,到分离胶的时候换高电压

另外，大神，请问电泳时冰浴的目的是什么啊~
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6楼2015-07-20 14:30:21
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by jiangwenting at 2015-07-20 14:30:21
另外，大神，请问电泳时冰浴的目的是什么啊~...

降低电泳系统温度，避免胶上出现翘带和模糊的问题
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
7楼2015-07-20 15:06:00
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