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jiangwenting

新虫 (初入文坛)

[交流] 跑电泳时,marker条带还没全跑开,目标条带还没出现,样品和marker就跑到电泳液离去了 已有2人参与

RT,做WB也快大半年了,从来没出现过这样的情况啊,一般都是分离胶跑了一半marker最末端的绿色条带就出现了,然后就是慢慢等各种条带跑得更开,有利于后续分析。仔细回忆了下,貌似分离胶的浓度也没弄错啊给跪了!这到底是个什么情况啊。。。。
会不会是浓缩胶小于2ml的缘故?但浓缩胶的作用不就是用来压平基线的吗。。。。
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HTweiyi

银虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
电泳时,可选择冰浴,浓缩胶不只是压平基线,还有将蛋白浓缩的作用,你可以试试增加一点浓缩胶,
或者在浓缩胶的时候用低电压,到分离胶的时候换高电压
2楼2015-07-20 09:37:38
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
谁说浓缩胶是压平基线的啊,那是水的活。。。
你做的是原核蛋白表达么?样品没有问题么?浓缩胶过少有时会出现你这种情况,当然不排除温度等其他原因,你可以把电压调低一点,跑时间长一点看看。
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
3楼2015-07-20 11:04:14
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jiangwenting

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-07-20 09:37:38
电泳时,可选择冰浴,浓缩胶不只是压平基线,还有将蛋白浓缩的作用,你可以试试增加一点浓缩胶,
或者在浓缩胶的时候用低电压,到分离胶的时候换高电压

真真学习到了!谢谢前辈啊~出问题的这次电泳时浓缩胶和分离胶分别定了60V和120V,您看是否合适?弱弱得再问个问题。。电压能设到10啊20啊这么低的值吗?
4楼2015-07-20 14:15:22
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jiangwenting

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-20 11:04:14
谁说浓缩胶是压平基线的啊,那是水的活。。。
你做的是原核蛋白表达么?样品没有问题么?浓缩胶过少有时会出现你这种情况,当然不排除温度等其他原因,你可以把电压调低一点,跑时间长一点看看。...

水不是用来压平分离胶的嘛?做的是普通的细胞提取蛋白,样品应该是没有问题的,不才也已经提了好多次啦~这次做的是百分之10的分离胶,以前做百分之8、12的都从来没初现过这种状况。
5楼2015-07-20 14:22:52
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jiangwenting

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-07-20 09:37:38
电泳时,可选择冰浴,浓缩胶不只是压平基线,还有将蛋白浓缩的作用,你可以试试增加一点浓缩胶,
或者在浓缩胶的时候用低电压,到分离胶的时候换高电压

另外,大神,请问电泳时冰浴的目的是什么啊~
6楼2015-07-20 14:30:21
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by jiangwenting at 2015-07-20 14:30:21
另外,大神,请问电泳时冰浴的目的是什么啊~...

降低电泳系统温度,避免胶上出现翘带和模糊的问题
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
7楼2015-07-20 15:06:00
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