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daidai0124

木虫 (正式写手)

[交流] 酶透析的问题

最近需要分离纯化酶,但是硫酸铵沉淀之后做透析就遇到了问题,大家做透析的时候透析袋是怎么扎的啊?有专门的夹子夹透析袋还是用细绳绑住啊,还有就是透析的时候一直用缓冲液吗?用缓冲液的话,蒸馏水的消耗量打的惊人啊,而且一般要透析好长时间!好像听人说可以先用自来水透析,再用缓冲液.不知道哪位大虾有这方面的经验,给介绍下啊!小弟在此谢过了!
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pph0259

木虫 (正式写手)


daidai0124(金币+1,VIP+0):谢谢了
有夹子就用夹子,不过夹子是有点小贵的!没有就只有扎绳子了,记得用棉绳!
不能用自来水透析!
不知道你的量,但是一般用不了太多的缓冲液,100-200ml一次,一次透析2-3h;换个2-3次就可以了!记着一定是少量多次的换,而不是用一大瓶缓冲,不进行更换。
2楼2008-08-05 22:57:58
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pph0259

木虫 (正式写手)


daidai0124(金币+1,VIP+0):以后做实验会注意这点
补充一句,最好在冰上透析,蛋白不容易失活
3楼2008-08-05 22:58:54
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daidai0124

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by pph0259 at 2008-8-5 22:57:
有夹子就用夹子,不过夹子是有点小贵的!没有就只有扎绳子了,记得用棉绳!
不能用自来水透析!
不知道你的量,但是一般用不了太多的缓冲液,100-200ml一次,一次透析2-3h;换个2-3次就可以了!记着一定是少量多 ...

夹子怎么买啊,我想卖试剂的公司买,,让他们给送点透析袋的夹子,他们也不知道是什么样的夹子,普通的夹子应该不行吧!这种夹子应该怎么样称呼呢?
我做的时候好想透析两三天都没透析完,我还是用500ml,基本上一天换两次水,不知道你是怎么检测硫酸铵是否透析完全,我是用氯化钡,一直到第三天都还能检测到沉淀!
4楼2008-08-06 08:24:10
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raindrop8316

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
daidai0124(金币+1,VIP+0):谢谢了
就叫“透析袋夹子”。

我们透析的时候是在冰箱里透析,4个小时换一次缓冲液。

[ Last edited by raindrop8316 on 2008-8-6 at 09:12 ]
书到用时方恨少 钱到月底不够花
5楼2008-08-06 09:10:50
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sunyi394

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
daidai0124(金币+1,VIP+0):谢谢
冰上透析,直接放冰箱4度不就 行了
6楼2008-08-06 09:21:29
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hqhe

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+4,VIP+0):积极交流奖
daidai0124(金币+1,VIP+0):谢谢
透析可以在层析柜里面进行,保持4度左右就行了
如果盐浓度过高最好梯度透析,以免过猛了引起沉淀
用多少透析液是需要根据你要透析的体积而定的,比如你透析的东西有5 ml以上,则需要至少800 ml以上的透析液才有较好的效果,这个在分子克隆等书上都能够查到的
7楼2008-08-06 10:21:27
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daidai0124

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by hqhe at 2008-8-6 10:21:
透析可以在层析柜里面进行,保持4度左右就行了
如果盐浓度过高最好梯度透析,以免过猛了引起沉淀
用多少透析液是需要根据你要透析的体积而定的,比如你透析的东西有5 ml以上,则需要至少800 ml以上的透析液才有 ...

不知大家做透析时使用蒸馏水还是缓冲液,如果是缓冲液的话,岂不要配好多啊,我要透析的东西可能有十几毫升,岂不要配十几升缓冲液?
8楼2008-08-06 15:15:05
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raindrop8316

金虫 (正式写手)

缓冲液透析。
没听说过用蒸馏水透析的,呵呵
书到用时方恨少 钱到月底不够花
9楼2008-08-06 15:21:14
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hqhe

木虫 (正式写手)

不要用水,用缓冲液,不然酶易失活
在一定的盐浓度下蛋白才稳定
10楼2008-08-06 20:39:19
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