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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 293T细胞越长越差，传代之后都不贴壁
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小马儿ing

新虫 (小有名气)

[求助] 293T细胞越长越差，传代之后都不贴壁 已有2人参与

我养293T细胞近一个月了，前段时间长得还挺好的，一般隔天传代。可是近一个星期细胞状态长得不怎么好，细胞状态一天不如一天，可是变化不怎么明显。有地方的细胞成层生长，有时候培养瓶的边缘细胞比培养瓶中间长得多。昨天中午传了一次代，到现在细胞都没有帖壁。请各位养过293T细胞的前辈、高手指点一二！谢谢！

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1楼 2015-07-15 10:34:09
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小马儿ing

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小刀188 at 2015-07-16 11:14:32
你在显微镜下仔细观察一下会不会有以下症状：
细胞状态变差,生长变慢，在显微镜下观察可能会有小黑点，但培养基一般不发生 浑浊，有时会有流沙状的东西出现。细胞传代以后就出现细胞间黑点，细胞空泡化，很多类似凋 ...

小黑点是像气泡那样的黑点吗？我一直以为是吹进去的气泡，看上去比较大，一瓶里面也就几个黑点。培基里没有沙子状的颗粒。后来细胞就死了，是支原体污染吗？

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5楼2015-07-18 17:01:39
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4455HWATAO

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-07-15 13:54:07
你有没有胰酶消化   消化的时间控制 的怎么样
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2楼2015-07-15 13:51:58
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小刀188

金虫 (正式写手)
你在显微镜下仔细观察一下会不会有以下症状：
细胞状态变差,生长变慢，在显微镜下观察可能会有小黑点，但培养基一般不发生 浑浊，有时会有流沙状的东西出现。细胞传代以后就出现细胞间黑点，细胞空泡化，很多类似凋亡、坏死的细胞，最终细 胞漂浮，完全死亡。这样一般就可以确定为支原体污染：
支原体清除方法选择：
1.        抗生素类产品：抗生素可以抑制细菌细胞壁及蛋白合成，支原体没有细胞壁，而且对细胞生长有一定影响，所以不建议用抗生素杀支原体。
2.        抗菌肽产品：抗菌肽产品杀支原体，是利用物理的方式，支原体和细菌表面带有正电荷，我们的抗菌肽表面带有负电荷，通过电荷间的引力作用，抗菌肽和支原体特异性结合，通过细胞膜的融合作用，可以在支原体表面类似打孔的方式，使得支原体裂解死亡。正常3天可以完全清除支原体污染
代表产品：genloci公司的MycoplasmaOUT™ Treatment（http://www.genloci.com/Product.aspx?CateId=240&Id=132）
3.        物理加热：有些国产血清写着建议灭活，其实是挂羊头卖狗肉， 56度加热30分钟更多的是为了杀支原体。实际上还有很多杀不死的。但可以降低产品支原体等微生物污染风险。
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3楼2015-07-16 11:14:32
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小马儿ing

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 4455HWATAO at 2015-07-15 13:51:58
你有没有胰酶消化   消化的时间控制 的怎么样

用的胰酶消化，在这次传代之前的上上次传代消化有点过了，但是消化过了那次传代之后细胞并没有长得特别差，但是再经过两次传代之后细胞就死了，后来那两次传代消化没过分，能判断是那次消化过分造成的吗？

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4楼2015-07-18 16:57:58
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