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293T细胞越长越差，传代之后都不贴壁 已有2人参与
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我养293T细胞近一个月了，前段时间长得还挺好的，一般隔天传代。可是近一个星期细胞状态长得不怎么好，细胞状态一天不如一天，可是变化不怎么明显。有地方的细胞成层生长，有时候培养瓶的边缘细胞比培养瓶中间长得多。昨天中午传了一次代，到现在细胞都没有帖壁。请各位养过293T细胞的前辈、高手指点一二！谢谢！ [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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你在显微镜下仔细观察一下会不会有以下症状： 细胞状态变差,生长变慢，在显微镜下观察可能会有小黑点，但培养基一般不发生 浑浊，有时会有流沙状的东西出现。细胞传代以后就出现细胞间黑点，细胞空泡化，很多类似凋亡、坏死的细胞，最终细 胞漂浮，完全死亡。这样一般就可以确定为支原体污染： 支原体清除方法选择： 1. 抗生素类产品：抗生素可以抑制细菌细胞壁及蛋白合成，支原体没有细胞壁，而且对细胞生长有一定影响，所以不建议用抗生素杀支原体。 2. 抗菌肽产品：抗菌肽产品杀支原体，是利用物理的方式，支原体和细菌表面带有正电荷，我们的抗菌肽表面带有负电荷，通过电荷间的引力作用，抗菌肽和支原体特异性结合，通过细胞膜的融合作用，可以在支原体表面类似打孔的方式，使得支原体裂解死亡。正常3天可以完全清除支原体污染 代表产品：genloci公司的MycoplasmaOUT™ Treatment（http://www.genloci.com/Product.aspx?CateId=240&Id=132） 3. 物理加热：有些国产血清写着建议灭活，其实是挂羊头卖狗肉， 56度加热30分钟更多的是为了杀支原体。实际上还有很多杀不死的。但可以降低产品支原体等微生物污染风险。 |
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