应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 500KD左右蛋白的WB该怎么做！！！
52/1返回列表
查看: 3221  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yhpzcx

铁虫 (小有名气)

[求助] 500KD左右蛋白的WB该怎么做！！！ 已有3人参与

最近在做500KD大小的WB，做了几次都没有想要的条带？
我的条件是
6%分离胶，4%浓缩胶跑的，大约跑了4h
转膜
0.45PVDF    10%甲醇  0.1%SDS转膜液
一直没有想要的条带
不知论坛里的大神们，有没有做过类似大小的蛋白，给小弟指点迷津
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-07-14 17:11:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小臭臭爱雷雷

新虫 (初入文坛)
求分享成功经验～目前也要做一个非常大的蛋白，想学习一下，谢谢楼主

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
11楼2017-03-27 14:14:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yhpzcx: 金币+5, ★★★很有帮助, 按这条件转了下，可以转上，不过把层析柜弄坏了。。。。 2015-07-21 17:04:29
以前做过一个原核蛋白表达的530kd蛋白，条件跟你的一样，不知道你的转膜时间是多少，我的是300ma，低温过夜，在冷室或层析柜里做。
最后，什么叫没有想要的条带，是什么条带都没有？还是说只是没有目的蛋白的条带？
赞一下 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
2楼2015-07-15 09:27:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yhpzcx

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-07-15 09:27:37
以前做过一个原核蛋白表达的530kd蛋白，条件跟你的一样，不知道你的转膜时间是多少，我的是300ma，低温过夜，在冷室或层析柜里做。
最后，什么叫没有想要的条带，是什么条带都没有？还是说只是没有目的蛋白的条带？...

非常感谢回复，我的转膜时间是14v转了18h。
没有目的蛋白的条带
因为是细胞样本，可能表达量不是太高
不知您，最后做出来了么
赞一下 回复此楼
3楼2015-07-15 10:54:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yhpzcx at 2015-07-15 10:54:00
非常感谢回复，我的转膜时间是14v转了18h。
没有目的蛋白的条带
因为是细胞样本，可能表达量不是太高
不知您，最后做出来了么...

嗯，重复了3次吧，最后做出来了。你的估计应该是样品的问题，大分子蛋白很容易降解的。
赞一下 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
4楼2015-07-15 16:55:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 i7NFEVbjQMM5 2026-08-16 5/250 2026-08-17 16:38 by CBFiACZS7HAK
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +4 angus9576 2026-08-17 7/350 2026-08-17 16:11 by Vivilian
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 EWi2p09MOOv8 2026-08-16 6/300 2026-08-17 14:02 by EYK67XJMj64E
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 i7NFEVbjQMM5 2026-08-16 4/200 2026-08-17 12:10 by 4GBAYCdVQoK3
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 4/200 2026-08-17 11:46 by 4GBAYCdVQoK3
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 3/150 2026-08-17 09:49 by xLVPIRuSvCUe
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭