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RNA提取之前，虾样肌肉组织处理的方法 已有3人参与
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请问在RNA提取之前，虾样肌肉组织处理的方法有几种？有涉及具体的试剂或仪器型号最好！目前知道的有液氮研磨法，还有如果有好的仪器推荐，也可以注明公司型号。 RNA提取之前的样品处理需注意哪些细节？ |
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4楼2015-07-14 17:52:05
2楼2015-07-14 15:46:59
jiqinger
铁杆木虫 (正式写手)
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- 性别: GG
- 专业: 化学环境污染与健康
3楼2015-07-14 16:40:50
【答案】应助回帖
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提取前的样品处理应该注意： 1. 在收获组织及细胞死亡之后，应立即灭活内源的RNA酶，以防止RNA降解。 以下3个方法均可有效使内源RNA酶失活： （1）用含离液（如胍盐）的细胞裂解液收获样品，并立即匀浆。 （2）用液氮瞬间冻结样品。值得特别注意的是：组织块必须保证足够小，在浸入液氮的瞬间就能冻结，以确保瞬间令RNA酶失活 （3）立即将样品置于RNAlater? Tissue Collection：RNA Stabilization Solution中。它是一种水相、无毒的收集试剂，能立即稳定并保护完整、未冻结的组织和细胞样品中的RNA。关键要点是组织样品切片一定要够薄（<0.5 cm），这样RNAlater才能在RNase破坏RNA之前迅速渗入组织块中。 2. 使用正确的细胞或组织储存条件 在样品用液氮瞬间冻结之后，应该储存在-80°C，千万不能解冻。即使是置于含有胍盐的裂解液中作匀浆前的短暂解冻，也会导致RNA的降解和损失。瞬间冻结的组织应该首先在超低温条件下先研磨成粉，然后置于裂解液中进行匀浆。这两步用机器操作，推荐一下上海净信的JXFSTPRP系列全自动样品快速研磨仪/匀浆仪。 RNAlater使样品储存更为便利。储存在RNAlater中的细胞或组织可在室温下稳定保存长达1个星期，在4°C可稳定保存长达1个月，或永久保存在-20°C。 3. 彻底匀浆样品 细胞或组织的彻底匀浆对RNA提取来说，是一个很关键的步骤，它能够防止RNA的损失和降解。匀浆的方法应根据细胞或组织的类型来选择。大部分培养的细胞可以置于细胞裂解液中，通过简单的涡旋震荡来匀浆；而动物组织、植物组织、酵母和细菌则常常需要更加剧烈的方法，上述说到的全自动样品快速研磨仪就可以用在这些样品上。如果是细菌的细胞壁，还可以结合酶消化来实现彻底的细胞裂解和RNA的最大回收。 4. 在RNA提取之前预处理样品裂解液 对于某些样品来说，在匀浆之后，RNA提取之前，还需要一些额外的处理步骤。对于脂肪含量高的组织，像脑组织和脂肪组织得到的裂解液，就需要通过氯仿抽提来去除脂类，从而提高RNA产量。许多植物组织中富含多酚和多糖，会降低RNA的质量和产量，用Plant RNA Isolation Aid 预处理裂解液可去除这些难以处理的成分。楼主的虾样肌肉组织就不需要了，这里只是拓展提一下。 5. 选择最好的RNA分离方法 现有众多的RNA分离方法也许令人难以取舍。目前最简单也是最安全的方法是柱式分离，如RNAqueous或RNAqueous-4PCR Kit。因为操作简单，所以这些步骤特别适用于同时处理多个样品。如果是处理复杂的组织，如富含核酸酶（胰腺）或脂肪（脑和脂肪组织）的样品，就推荐使用更加严格的、基于酚处理的RNA分离方法。 |
5楼2015-07-29 15:52:50
