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waxSnail

铜虫 (小有名气)

[求助] PDH酶活检测

我参考附件里的这篇文献进行PDH的酶活测定,使用的是从肺癌细胞或小鼠肝脏中粗提的线粒体。
先是通过用多功能酶标仪,利用96孔全黑板,检测NADH自发荧光的方法,后是用的INT-PMS的方法,体系都是参考文献中的。
荧光法检测,预计的结果应该是实验组即加入丙酮酸钠的组,荧光值应该上升,对照组即不加丙酮酸钠的组荧光值应该基本不变,通过实验组和对照组荧光速率的差异计算酶活力。但是实际结果是加了丙酮酸,荧光是下降的,不加丙酮酸的体系中荧光上升。
参考INT-PMS的方法测活,还是用酶标仪检测,吸光值在实验组和对照组都是上升的,对照组比实验组升的还快!另外,在该方法中提到加过量的NADH作为还原剂,我也不理解是什么意思。
不知道问题出在哪里?哪位大神可以指点迷津?不胜感激!
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