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[交流]
ATPase Km值得测定，前面几个点反应速率上不去，Km值很高！！
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大家好小弟最近在做一个ATPase Km值的测定，但是测得的前面几个低浓度的反应速率上不去，得出的Km值很高，比同源的酶高10-20倍，graphpad绘图近似一条斜线，只有偶尔会是矩形双曲线。 time course 确定酶浓度5nM，反应时间5-10min。 我的浓度梯度是0,50,100,250,500,1000,1500，，2000μM ATP，用排枪操作。 不知道什么原因前面几个点的反应速率就是上不去，得出的浓度-速率曲线总是近似一条斜线，Km值都上mM了~ 希望哪位高手能够知道一下，或者是一起探讨一下，小弟在此谢过了！！ 本来想发个求助帖的，金币只有3.5，只好发个交流贴了 |
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