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蛋炒饭1989

金虫 (小有名气)

[求助] 想请教植物组织培养的童鞋。。。 已有5人参与

大家好,
    最近我在做植物组织培养,遇到了一些问题,希望大家能够指点指点:
1,我用植物的嫩组织组培,无菌水冲洗干净后,放在2%次氯酸钠溶液中,刚放进去就开始变色(),然后我拿出来冲洗几遍后,放到培养基中;时间越长发现植物居然化了。。。不知道是什么原因。
嫩组织该怎么消毒呢????
2.还有一个就是,灰尘样的种子怎么消毒灭菌啊,太小了,有没有什么好方法啊?

      谢谢虫虫们
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春暖花开
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青草007

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
银绳: 金币+2, 谢谢应助回帖,共同交流 2015-07-08 17:12:04
蛋炒饭1989: 金币+10 2015-07-09 18:09:29
化了是因为消毒太过了,要么受不了这么高的消毒液浓度,要么消毒时间太长
关于种子太小的,可以消毒果荚,或用滤纸来过滤消毒液,或者将矿泉水瓶剪开,上下都开口,下面用纱布封上,可以漏水,但种子漏不过去,消毒液用烧杯装着,把这个放在烧杯里面,消毒完后提起来就好了,沥开水
最后就是所有的行头都要高压灭菌

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开在向阳处的花,很美
2楼2015-07-08 00:25:46
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18986641153

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
蛋炒饭1989: 金币+10 2015-07-10 11:20:53
1,我用植物的嫩组织组培,无菌水冲洗干净后,放在2%次氯酸钠溶液中,刚放进去就开始变色(),然后我拿出来冲洗几遍后,放到培养基中;时间越长发现植物居然化了。。。不知道是什么原因。嫩组织该怎么消毒呢????
2.还有一个就是,灰尘样的种子怎么消毒灭菌啊,太小了,有没有什么好方法啊?
化了就是消毒消死了,的确是因为你消毒太过了,要么你的消毒液浓度太高,要么消毒时间太长,在2%次氯酸钠溶液中消毒,幼嫩组织12分钟就可以了(次氯酸钠没有分解,变质)
关于种子太小的,是可以采取消毒果荚的方法,前提是果夹7-8分熟,自己采取的未开裂;对于开裂了的果夹一定要用小号注射器来过滤消毒,将小种子(如兰科植物以及水晶兰等的种子)1兰科植物种子:放在消毒剂中消毒完后,用小号注射器来吸取消毒液,然后直接加入无菌水,随后用注射前吸取上层的液体,重复一次,吸取水吸的差不多时(不要完全洗完,留一点水,方便取种子),用无菌的钥匙将其放到培养基上面;2水晶兰种子(我目前做过的最小最难做的种子)要用多根注射前同时交替进行,可以漏水但种子漏不过去的注射器用来吸水和消毒剂,用孔径大的种子水都能吸取的注射器吸取种子直接射到培养基上面,这类方法的成功率很高,只是速度较慢,另外所有的用具都要高压灭菌,操作环境必须无菌,操作者手用酒精至少查个两次!!!
     最后祝你早日成功!!!!
做人,做事,做学问!!!
7楼2015-07-10 08:19:16
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646800558

木虫 (小有名气)

小种子的话,可以用一次性的茶包装好然后在上面戳几个小洞,保证水和消毒液能迅速浸入或流出,按照正常的消毒灭菌程序就可以了,最后用解剖刀或剪刀剪开

发自小木虫IOS客户端
10楼2015-09-26 22:40:46
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普通回帖

猪猪控w

银虫 (初入文坛)

你尝试下降低浓度
3楼2015-07-08 10:37:26
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久久琼殷

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
蛋炒饭1989: 金币+10 2015-07-09 18:09:36
为了不额外的增加过多的工作量以及你的外植体数量充足的情况下,可以在接种前尝试一下组织放在消毒液不同时间后发生的变化,如果变化依旧很快,那就降低浓度或者换不同的消毒方法,组织培养中外植体消毒的方式还是比较多的。此外,你说的幼嫩组织,如果本身该组织就是被包裹起来的话,那它自身染菌的几率也会很小的,所以也要相对的降低消毒时间以及浓度,如果是比较脏的,比如一直与泥土接触这种情况的话,就用流水冲吧,冲的时间由你外植体的大小和部位有关,以前我们做的时候,有冲过好几天的,那样也可以降低染菌的几率。
    关于小种子,我没有做过,2楼的方法感觉还不错的!
4楼2015-07-09 09:10:38
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蛋炒饭1989

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 久久琼殷 at 2015-07-09 09:10:38
为了不额外的增加过多的工作量以及你的外植体数量充足的情况下,可以在接种前尝试一下组织放在消毒液不同时间后发生的变化,如果变化依旧很快,那就降低浓度或者换不同的消毒方法,组织培养中外植体消毒的方式还是比 ...

你好,我想问一下,你们做组培时所有的植物是不是都先需要拿酒精擦一遍?
春暖花开
5楼2015-07-09 18:11:26
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18986641153

银虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 蛋炒饭1989 at 2015-07-09 18:11:26
你好,我想问一下,你们做组培时所有的植物是不是都先需要拿酒精擦一遍?...

酒精里面泡10秒,然后迅速转移到深汞或次录酸钠中12-20分钟,具体看你是什么样材料和浓度,然后用无菌水冲洗2-3遍
做人,做事,做学问!!!
6楼2015-07-10 07:48:13
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27511258

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

找一件不用的衬衫,致密的那种,剪下一小块,可以叠两层,包裹好你的种子,用细线包扎好,直接放进酒精里灭菌10s,然后在放进升贡中灭菌。裁剪下的小布用洗衣粉洗净,用75%酒精泡一夜后再使用效果更佳!
8楼2015-09-24 17:04:27
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yvonne9044

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

升汞感觉对植物的伤害比次氯酸钠小很多,你可以试试,材料如果没有文献支持正常都要探索最佳消毒时间的,种子的问题,纱布,注射器的方法我都用过,我觉得注射器好一些,纱布上面粘了种子更不好弄,还要用牙签挑,种子放在离心管里用移液器洗,我觉得蛮好的,但我最小只洗过拟南芥的种子

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9楼2015-09-25 18:19:05
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