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含拟南芥基因构建的GFP载体农杆菌打烟草后无荧光,会是什么原因
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我最近构建了一个载体,是拟南芥一个基因自身启动子+该基因CDs+GFP,将这个质粒转入农杆菌C58后,打入烟草叶片下表皮,在荧光显微镜下观察,却没有荧光出现。想问一下,这可能是什么原因造成的。 补充信息:1、在将农杆菌打入烟草前,我鉴定过单菌落,用该基因CDs的引物能够扩出相应的片段; 2、我还有另外一个载体,是35S启动子+该基因CDs+GFP,同样打烟草后是可以看到荧光的,而我在构建自身启动子的载体时,是将35S启动子切下来,换成自身自动自,CDs+GFP那一段我都没有动过。 3、构建的自身启动子+该基因CDs+GFP的这个质粒,构建好后,我选用了几个酶切位点,鉴定构建是否正确,当时的酶切后的电泳图显示酶切后的条带是正确的。 |
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