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su1154957

银虫 (小有名气)

[交流] [急!!]大肠杆菌基因工程菌不加诱导剂蛋白也表达

我用的是BL21(DE3),质粒pet30a,以前用的是LB做对照,没有问题。但是现在用TB培养基做对照,没有加任何诱导剂,表达量很高,不知道怎么回事,TB培养基配方也很简单,就蛋白胨、酵母、甘油、磷酸盐。
我现在怀疑是之前实验室的人构建这个工程菌的时候出了问题,不知道有没有这个可能:工程菌构建好之后,在LB培养基里做了诱导与不诱导的实验,但是没有用别的培养基试一试。而LB培养基因为营养物质有限的缘故,表达量很低,几乎与没有诱导无差别,就把它当作没有表达了。
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superwheat

银虫 (正式写手)

两次实验中间有没有换过培养基的品牌或者批次?
有一个可能性是蛋白胨里面也许会多少含有些乳糖,也许新的蛋白胨里面含的乳糖比较多,乳糖也有和IPTG一样的诱导作用。
当然,也有可能你的什么东西被IPTG污染咯。
2楼2008-07-31 15:01:34
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xyfu

金虫 (小有名气)

可能是高浓度的酵母粉在起作用。可以参考一下我的文章:

Effect of yeast extract on the expression of thioredoxin-human parathyroid hormone from recombinant Escherichia coli. Journal of Chemical Technology and Biotechnology, 2006, 81(12): 1866-1871.
3楼2008-07-31 16:19:10
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su1154957

银虫 (小有名气)

xyfu能发给我全文吗?
zhshq25@163.com
刚在网上搜了一下,没搜到全文
4楼2008-07-31 20:57:20
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xyfu

金虫 (小有名气)

su1154957,已经发到你信箱。请注意查收。
5楼2008-08-01 01:48:12
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su1154957

银虫 (小有名气)

非常感谢xyfu:
6楼2008-08-01 09:10:56
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