| 查看: 292 | 回复: 2 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
求助TCA沉淀蛋白的具体方法
|
|||
| 我表达的蛋白是在培养上清液中，表达的量少，想用TCA来沉淀一下，请问一下具体的操作，另外还有什么更好的方法，请大家帮忙介绍一下，有人推荐使用超滤管，但是管壁上吸附的蛋白损失是不是大呀？谢谢大家了 |
回复此楼» 猜你喜欢
拟解决的关键科学问题还要不要写
已经有8人回复
-
存款400万可以在学校里躺平吗
已经有30人回复
-
最失望的一年
已经有12人回复
-
求推荐英文EI期刊
已经有5人回复
-
请教限项目规定
已经有4人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有20人回复
-
26申博
已经有3人回复
-
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？
已经有10人回复
-
基金申报
已经有6人回复
-
疑惑？
已经有5人回复
2楼2008-07-30 17:30:38
peizhilee
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1104.9
- 散金: 2
- 帖子: 272
- 在线: 19.4小时
- 虫号: 450952
- 注册: 2007-11-04
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
|
TCA沉淀方法： 1.菌液10000g,离心5分钟，收集表达上清。 2.取500-1000ul上清于EP管中，加入1/9体积的100％TCA，颠倒10次混匀。 3.样品置于冰浴中大于0.5小时，过夜效果更好。 4.15000g,离心10－20分钟,可见有棕黑色沉淀，倒掉上清，将EP管倒扣在吸水纸上轻轻控几下，除去残余在管口的液体。用10ul枪头尽量吸去管底残余的液体 5.加入500ul冰冷的丙酮，用手指轻弹EP管，洗去管底和管壁残余的TCA。 6.15000g,离心10－20分钟,倒掉上清，将EP管倒扣在吸水纸上轻轻控几下，除去残余在管口的液体 7.EP管倒置于吸水纸长，37度烘箱5分钟，确认管壁和管底没有液体残留。 8.加入20－50ul Loading buffer，95度加热10nim，一般沉淀会自动溶解，如果不溶，用手指轻弹管壁或用20ul枪头轻轻吸打，注意整个 操作尽量不要碰到管壁，因为管壁可能沾有残余TCA。如果蓝色的Loading buffer不变成黄色，说明残余TCA吸弃了干净，如果变黄，一般不影响电泳。此方法连丙酮洗这一步都省了，而且不影响电泳效果。 |
3楼2008-07-31 00:31:48