| 查看: 1083 | 回复: 6 | |||
dongying1105木虫 (小有名气)
|
[交流]
复苏总也不成功，求大神看帖解答！
|
|
本校药理实验为萌芽阶段，培养过4种细胞A549 HT1080 SGC7901 Hela 冻存步骤如下： 前一天常规换液； 胰酶消化至显微镜下细胞变圆，细胞呈流沙状掉落，以培养基中和，吹成悬浊液； 离心 2000r/min 1min； 吸取上清液，加入冻存液（7培养基：2血清：1DMSO），吹打成悬液，冻存管冻存； 4℃冷藏30min，-20℃冷冻1h，液氮保存。 复苏步骤如下： 液氮取出，37℃水浴 静置3min，离心2000r/min 1min； 吸出冻存液，加入培养基吹打成悬液，37℃培养。  问题来了，不管是什么细胞，都不爱贴壁，而且形状都是圆的，像碎片，求大神解救！ |
回复此楼» 猜你喜欢
自荐读博
已经有9人回复
-
投稿Elsevier的杂志（返修），总是在选择OA和subscription界面被踢皮球
已经有8人回复
-
自然科学基金委宣布启动申请书“瘦身提质”行动
已经有4人回复
-
求个博导看看
已经有18人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 各位大神看过来~ ARCGIS菜鸟跪求各位高手解答
已经有14人回复
- 对筛选分离的六个菌做了16sRNA或18sRNA鉴定，跨学科的，序列看不懂，求大神指导！！！
已经有10人回复
- 静电纺丝法总是不能成功，求助大神啊！！！
已经有44人回复
- HepG2细胞复苏不成功，求解!
已经有9人回复
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
我查了一下atcc 的a549用的是f12k的培养基，楼主需要先保证培养基的正确.然后要注意细胞浓度问题。 In F-12K these cells are well-attached with an epithelial-like morphology. They will form a nice monolayer of cobblestone patterned cells at confluence, but will be less cuboidal at subconfluence. When subculturing we seed the cells at an inoculation density between 2 X 10(3) and 1 X10(4) viable cells/cm2 and maintain the cultures at a concentration between 2 X 10(3) and 6 X 10(4) cells/cm2; never exceeding 7 X 10(4) cells/cm2. |
2楼2015-07-02 15:44:39
3楼2015-07-02 16:14:37
 |
4楼2015-07-02 16:32:02
5楼2015-10-11 22:20:32
湘西小伙儿
金虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1971.4
- 散金: 500
- 红花: 1
- 帖子: 516
- 在线: 93.1小时
- 虫号: 3715833
- 注册: 2015-03-06
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
消化有点过了，消化的时候细胞变圆就差不多了。细胞冻存复苏讲究慢冻速溶，从-20再经过-80，再放入液氮，复苏的时候应该快速解冻，在水浴锅中要不停摇晃 发自小木虫Android客户端 |
6楼2015-10-12 09:18:30
7楼2015-12-03 18:41:04