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dongying1105木虫 (小有名气)
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复苏总也不成功，求大神看帖解答！
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本校药理实验为萌芽阶段，培养过4种细胞A549 HT1080 SGC7901 Hela 冻存步骤如下： 前一天常规换液； 胰酶消化至显微镜下细胞变圆，细胞呈流沙状掉落，以培养基中和，吹成悬浊液； 离心 2000r/min 1min； 吸取上清液，加入冻存液（7培养基：2血清：1DMSO），吹打成悬液，冻存管冻存； 4℃冷藏30min，-20℃冷冻1h，液氮保存。 复苏步骤如下： 液氮取出，37℃水浴 静置3min，离心2000r/min 1min； 吸出冻存液，加入培养基吹打成悬液，37℃培养。  问题来了，不管是什么细胞，都不爱贴壁，而且形状都是圆的，像碎片，求大神解救！ |
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我查了一下atcc 的a549用的是f12k的培养基，楼主需要先保证培养基的正确.然后要注意细胞浓度问题。 In F-12K these cells are well-attached with an epithelial-like morphology. They will form a nice monolayer of cobblestone patterned cells at confluence, but will be less cuboidal at subconfluence. When subculturing we seed the cells at an inoculation density between 2 X 10(3) and 1 X10(4) viable cells/cm2 and maintain the cultures at a concentration between 2 X 10(3) and 6 X 10(4) cells/cm2; never exceeding 7 X 10(4) cells/cm2. |
2楼2015-07-02 15:44:39
3楼2015-07-02 16:14:37
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4楼2015-07-02 16:32:02
5楼2015-10-11 22:20:32
湘西小伙儿
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消化有点过了，消化的时候细胞变圆就差不多了。细胞冻存复苏讲究慢冻速溶，从-20再经过-80，再放入液氮，复苏的时候应该快速解冻，在水浴锅中要不停摇晃 发自小木虫Android客户端 |
6楼2015-10-12 09:18:30
7楼2015-12-03 18:41:04
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