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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒小提怎么出了两条带
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fengzhiyong

铜虫 (初入文坛)

[交流] 质粒小提怎么出了两条带

我用实验室转化了的冻存菌做小提，结果检验的时候跑出两条带，于是切胶回收了目的条带，但再跑电泳又出现了大的条带。请教达人大条带是什么？怎么产生的？如何避免或去除？

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-16 at 20:29 ]
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1楼 2008-07-28 19:42:12
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liuzhenhai

铁杆木虫 (正式写手)

我佛慈悲！！！

★
fengzhiyong(金币+1,VIP+0):谢谢
楼主，你什么学校的？没有凝胶成像系统吗？质粒有三种存在形式：超螺旋，松弛型，开环。所以跑出两条带正常，但要注意判断大小是否正确！！！
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2楼2008-07-28 19:56:45
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fengzhiyong

铜虫 (初入文坛)
我是个新手，多谢指教。
但是感觉哪条带比目的片断大很多，而且亮度也更亮，会是松弛型，开环的DNA吗？
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3楼2008-07-28 20:09:12
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biogefart

木虫 (著名写手)

酶切后电泳！

★
fengzhiyong(金币+1,VIP+0):谢谢
如果不是做构象相关研究，请酶切后再电泳
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闹太套
4楼2008-07-28 21:32:36
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界
★
fengzhiyong(金币+1,VIP+0):谢谢
没错，这是质粒的不同形式，很有可能两条带跟你的预期都会有差异的，只要找一个单一切点的内切酶切开之后再跑电泳，切得完全的话，会得到一条带的，大小跟你的预期一致。
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位卑未敢忘忧国。
5楼2008-07-29 00:42:04
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
一般提质粒俩条到三条带都很正常 可以直接做酶切 连接片断
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6楼2008-07-30 19:57:13
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