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zx1984

木虫 (正式写手)

应助: 21 (小学生)
金币: 7468.7
散金: 2765
红花: 2
帖子: 434
在线: 374.5小时
虫号: 1176692
注册: 2010-12-24
性别: GG
专业: 出血、凝血与血栓

[求助] 蛋白纯化已有3人参与

我冬天在室温用阴离子柱纯化的很好的蛋白，为什么现在纯化不出来了？冬天室温在10℃左右，现在室温25℃左右，平时柱子就在屋子里放着（大概30℃左右）。是不是温度太高对纯化有影响？还是其它原因？请诸位多多指点！谢谢！

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1楼2015-06-18 16:43:04

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

shenhaiwang

金虫 (小有名气)

应助: 15 (小学生)
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红花: 4
帖子: 282
在线: 140小时
虫号: 1251757
注册: 2011-04-01
专业: 蛋白质组学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

温度高的话，如果你的目的蛋白不稳定，容易降解。你的杂带有可能是目的蛋白的降解条带。你可以作业个WB看一下，杂带是否和你的抗体反应，如果杂带也反应的话，说明你的目的蛋白降解了。在冰上操作一次吧。看看能不能好些。还有一个问题，就是把你的洗脱体积加大，这样虽然纯化的目的蛋白浓度会低些，纯度会有所改善，最后浓缩一下就可以。