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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 求助：为什么我做的SD大鼠心肌组织NF-KB p65总是130比65明显得多！！求指点!
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jessechoujun

新虫 (小有名气)

[求助] 求助：为什么我做的SD大鼠心肌组织NF-KB p65总是130比65明显得多！！求指点! 已有1人参与

最近做western Blotting ,发现不管怎么改条件：条带出来的总是130比65明显很多，求高手指点！换个各种还原剂和加热条件，抗体是cst，求指点
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1楼 2015-06-16 18:22:30
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绯红誓言

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jessechoujun: 金币+10, ★有帮助, 求QQ当面指点，谢谢 2015-06-17 10:43:32
你说“130ＫＤ比65ＫＤ明显很多”，首先你认为130kd的是NF-KB p65的二聚体，才换个各种还原剂和加热条件！但是有可能是SD大鼠心肌组织放置时间过久，最好使用新鲜的试试！
另外可以看看抗体说明书确定NF-kb有几条带，及看你的参考文献上的图片相同的公司抗体及相同的组织、细胞来源。ＰＳ：最好能上图片！
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2楼2015-06-16 23:37:21
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jessechoujun

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 绯红誓言 at 2015-06-16 23:37:21
你说“130ＫＤ比65ＫＤ明显很多”，首先你认为130kd的是NF-KB p65的二聚体，才换个各种还原剂和加热条件！但是有可能是SD大鼠心肌组织放置时间过久，最好使用新鲜的试试！
另外可以看看抗体说明书确定NF-kb有几条带 ...

组织是在-80度中保存有半年了，抗体说明书是只有一条带，在65的位置，我有用过抗体的阳参，也是在65的位置，难道真如您所说，样品放置时间太长？
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3楼2015-06-17 10:42:52
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