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jessechoujun

新虫 (小有名气)

[求助] 求助:为什么我做的SD大鼠心肌组织NF-KB p65总是130比65明显得多!!求指点! 已有1人参与

最近做western Blotting ,发现不管怎么改条件:条带出来的总是130比65明显很多,求高手指点!换个各种还原剂和加热条件,抗体是cst,求指点
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绯红誓言

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
jessechoujun: 金币+10, 有帮助, 求QQ当面指点,谢谢 2015-06-17 10:43:32
你说“130KD比65KD明显很多”,首先你认为130kd的是NF-KB p65的二聚体,才换个各种还原剂和加热条件!但是有可能是SD大鼠心肌组织放置时间过久,最好使用新鲜的试试!
另外可以看看抗体说明书确定NF-kb有几条带,及看你的参考文献上的图片相同的公司抗体及相同的组织、细胞来源。PS:最好能上图片!
2楼2015-06-16 23:37:21
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jessechoujun

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 绯红誓言 at 2015-06-16 23:37:21
你说“130KD比65KD明显很多”,首先你认为130kd的是NF-KB p65的二聚体,才换个各种还原剂和加热条件!但是有可能是SD大鼠心肌组织放置时间过久,最好使用新鲜的试试!
另外可以看看抗体说明书确定NF-kb有几条带 ...

组织是在-80度中保存有半年了,抗体说明书是只有一条带,在65的位置,我有用过抗体的阳参,也是在65的位置,难道真如您所说,样品放置时间太长?
3楼2015-06-17 10:42:52
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