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njml

金虫 (小有名气)

[交流] 将酶修饰后加50%甘油保存,要进行下一步试验需要除去甘油吗?如何除去?

将酶修饰后加50%甘油保存,要进行下一步试验需要除去甘油吗?如何除去?
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njml

金虫 (小有名气)

谢谢你!
我在做抗体与酶的连接,用交联剂SPDP.先把酶用SPDP修饰,过Sephadex G25脱去多余的SPDP,浓缩后加50%甘油-20保存。
下一步是把酶与SPDP修饰过的抗体连接。
3楼2008-07-27 00:01:12
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界

关键看你下一步的试验是什么。
一般不需要去除甘油的,我们用的很多酶都是在甘油中保存的,像Taq酶和限制酶,酶的量一般加入很少的,对下一步的体系不会有大的影响的。
但是有谢限制酶有对甘油的量的要求,甘油太多了或者酶量太大,酶切时间过长都会出现star activity的
位卑未敢忘忧国。
2楼2008-07-26 13:42:01
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duanyongzhong

银虫 (正式写手)

需要去除甘油的,不去除会影响酶活,用透析的方法除去!
5楼2008-07-28 16:57:24
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house

银虫 (正式写手)

超滤,如截留10KDa等的离心式超滤管,简单易用。whatman或millipore公司都有。
或是直接过分子筛,如 G50,G100等葡聚糖分子筛。
6楼2008-07-29 09:46:05
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