| 查看: 1058 | 回复: 1 | |||
[求助]
竞争抑制ELISA，加入竞争物之后OD值反而变高 已有1人参与
|
|
本人在做噬菌体肽库筛选抗原表位，做到了第二轮验证阶，需要进行竞争抑制ELISA 包被IgG抗体100ug/ml（重组蛋白免疫兔子做多抗，纯化IgG抗体所得),加入淘选后的噬菌体和竞争抗原（重组蛋白），竞争抗原的浓度梯度为100ug/ml, 10ug/ml, 1ug/ml, 100ng/ml, 10ng/ml, 1ng/ml.混匀后加入。二抗为抗噬菌体的二抗。 最后结果令人诧异！！随着竞争物浓度的增加，OD值不仅没有减少 反而增加了。这是怎么回事？？？ 而且，甚至高浓度的抑制物孔的OD值比没有加抑制物孔的阳性对照孔还要高。有哪位高人可以帮助解决吗？？ 重组蛋白，二抗、血清都已经验证，没有问题。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 噬菌体展示 |
» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有202人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有2人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- Elisa 实验时实验组的OD值范围一般是多少的
已经有3人回复
- 间接竞争ELISA中OD值测定结果有问题
已经有6人回复
- 间接ELISA实验，阴性值偏高，本底正常，且阴性血清随稀释度OD值呈现梯度
已经有3人回复
- elisa 实验OD值出现负值，甚至低浓度的标准品也出现负值。
已经有9人回复
- 【求助/交流】竞争性ELISA 竞争孔比稀释孔OD值高
已经有13人回复
【答案】应助回帖
|
１.在你说的"随着竞争物浓度的增加，OD值不仅没有减少,反而增加了;高浓度的抑制物孔的OD值比没有加抑制物孔的阳性对照孔还要高"可以认为：你加入的竞争蛋白在结合了噬菌体后结合到你包被的抗体上了，验证了他们在你建立的模型中不存在明显竞争关系。 ２.你建立的模型是兔IgG多抗与噬菌体竞争结合重组蛋白的，这个本生就存在问题。因为多抗表位复杂，而噬菌体也可能是针对多个抗原表位，两者在同时结合重组蛋白上，可能有结合部分相同表位，但不是全部，这就导致不一定存在竞争关系。ＰＳ：单抗更合适你的模型。 ３.既然是竞争，你的包被抗体浓度不能太大，即使有竞争，以游离噬菌体的量也不一定竞争得过。 |
2楼2015-06-16 23:25:22
