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竞争抑制ELISA，加入竞争物之后OD值反而变高 已有1人参与
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本人在做噬菌体肽库筛选抗原表位，做到了第二轮验证阶，需要进行竞争抑制ELISA 包被IgG抗体100ug/ml（重组蛋白免疫兔子做多抗，纯化IgG抗体所得),加入淘选后的噬菌体和竞争抗原（重组蛋白），竞争抗原的浓度梯度为100ug/ml, 10ug/ml, 1ug/ml, 100ng/ml, 10ng/ml, 1ng/ml.混匀后加入。二抗为抗噬菌体的二抗。 最后结果令人诧异！！随着竞争物浓度的增加，OD值不仅没有减少 反而增加了。这是怎么回事？？？ 而且，甚至高浓度的抑制物孔的OD值比没有加抑制物孔的阳性对照孔还要高。有哪位高人可以帮助解决吗？？ 重组蛋白，二抗、血清都已经验证，没有问题。 |
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 噬菌体展示 |
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【答案】应助回帖
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１.在你说的"随着竞争物浓度的增加，OD值不仅没有减少,反而增加了;高浓度的抑制物孔的OD值比没有加抑制物孔的阳性对照孔还要高"可以认为：你加入的竞争蛋白在结合了噬菌体后结合到你包被的抗体上了，验证了他们在你建立的模型中不存在明显竞争关系。 ２.你建立的模型是兔IgG多抗与噬菌体竞争结合重组蛋白的，这个本生就存在问题。因为多抗表位复杂，而噬菌体也可能是针对多个抗原表位，两者在同时结合重组蛋白上，可能有结合部分相同表位，但不是全部，这就导致不一定存在竞争关系。ＰＳ：单抗更合适你的模型。 ３.既然是竞争，你的包被抗体浓度不能太大，即使有竞争，以游离噬菌体的量也不一定竞争得过。 |
2楼2015-06-16 23:25:22