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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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renyanzhecll

木虫 (正式写手)

将军

[交流] 求助!

哪位高人可知道 :PCR胶回收所得DNA浓度低的因素有哪些?

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-16 at 20:41 ]
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

1、切胶的时候,没切全
2、溶胶不充分,与柱子结合不充分(可以用2楼的方法,离心后别马上弃液,重新加入柱子再离)
3、乙醇(或者含乙醇的buffer)洗涤的时候,没有把乙醇离心离干净,或者挥发干净,另外,不小心把乙醇buffer碰到柱子底部,也会损失DNA
4、分次多步洗脱是个不错的方法
5、洗脱的buffer一定要好,试剂盒一般是用Tris-HCl,pH8左右的碱性溶液。用水洗脱请保证水略偏碱性。不建议用TE,因为EDTA可能会影响你的后续实验。
3楼2008-07-26 00:25:50
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hu6704526

银虫 (小有名气)

试剂盒本身的回收就有一定的损失,你可以将溶胶后的buffer重新离心一次提高回收的效率,还有最后在洗脱的时候最好洗脱两次,比如用十微升洗过两次比用二十微升一次洗脱效果要好。还有自己的pcr产物的量一定要够,还有切的胶也不能有损失哦
2楼2008-07-25 22:57:54
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

原因很多:
1 获得的原产物是不是量足够
2 电泳是缓冲液是不是新配制的
3 胶是否够厚
4 试剂盒是不是很好 建议用TaKaRa的
5 最后加水量要合适 少了洗脱效率不高 多了浓度不够
4楼2008-07-26 19:32:00
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