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renyanzhecll

木虫 (正式写手)

将军

[交流] 求助！

哪位高人可知道 ：PCR胶回收所得DNA浓度低的因素有哪些?

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-16 at 20:41 ]
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1楼 2008-07-25 22:15:01
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hu6704526

银虫 (小有名气)
试剂盒本身的回收就有一定的损失，你可以将溶胶后的buffer重新离心一次提高回收的效率，还有最后在洗脱的时候最好洗脱两次，比如用十微升洗过两次比用二十微升一次洗脱效果要好。还有自己的pcr产物的量一定要够，还有切的胶也不能有损失哦
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2楼2008-07-25 22:57:54
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
1、切胶的时候，没切全
2、溶胶不充分，与柱子结合不充分（可以用2楼的方法，离心后别马上弃液，重新加入柱子再离）
3、乙醇（或者含乙醇的buffer）洗涤的时候，没有把乙醇离心离干净，或者挥发干净，另外，不小心把乙醇buffer碰到柱子底部，也会损失DNA
4、分次多步洗脱是个不错的方法
5、洗脱的buffer一定要好，试剂盒一般是用Tris-HCl，pH8左右的碱性溶液。用水洗脱请保证水略偏碱性。不建议用TE，因为EDTA可能会影响你的后续实验。
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3楼2008-07-26 00:25:50
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
原因很多：
1 获得的原产物是不是量足够
2 电泳是缓冲液是不是新配制的
3 胶是否够厚
4 试剂盒是不是很好 建议用TaKaRa的
5 最后加水量要合适 少了洗脱效率不高 多了浓度不够
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4楼2008-07-26 19:32:00
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