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xh446063

新虫 (小有名气)

[求助] 酶连已有3人参与

请教各位

      我最近在用TAKARA的T4 DNA连接酶做载体(6.5kb)和目的片段(0.5kb)的连接,但是翻看了一下说明书,没有推荐反应体系,不知道怎样的配比才能提高连接效率,请各位指点迷津,另外大家都在用什么反应条件,我看有37℃,16℃和4℃,哪个方法高效快捷呢?谢谢
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geyihui

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 董博士 at 2015-06-14 13:23:01
将载体和目的片段都提取好之后测浓度,两种的摩尔比1:3-1:10直接都可以,连接温度16度的效果可能比较好一点

就是用浓度除以相应碱基数吗,得到对应的摩尔比吗,16度过夜链接吗。最近在电转建库,连接效率一直不高,再问一下,是不是片段浓度太高,酶切效率就不高
8楼2015-07-21 10:09:46
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