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小橘子2013

新虫 (小有名气)

[求助] 酵母做电转时点转杯大小有关系吗 已有1人参与

最近在做酵母电转化，实验室只有0.4mm点转杯，想问一下需要用多少感受态和线性化后的质粒呢？
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简简单单才是真
1楼 2015-06-08 16:33:14
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luwei13566

木虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 小橘子2013 at 2015-06-11 15:53:01
好的 受教了 谢谢你的帮助   
现在还有一个问题，就是酵母诱导表达的时候用BMGY长到OD600=2-6，收集菌体再用一定BMMY重悬使其OD600=1.从这时开始计算每24H添加一次甲醇是吧？刚换完培养基是不能加甲醇是是吗？...

换培养基的时候就加上甲醇。
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大家相互帮助哈
15楼2015-06-11 22:12:00
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
我们一般用0.2的或者0.1的，理论上大点影响也不是很多。

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2楼2015-06-08 19:15:19
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by guoqin_shiyin at 2015-06-08 19:15:19
我们一般用0.2的或者0.1的，理论上大点影响也不是很多。

我是想问 每个大小的杯子都有自己的容量吧  电转的话是都要装满吗  如果感受态和质粒不够的话  需要用什么补齐吗  山梨醇可以吗
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简简单单才是真
3楼2015-06-08 21:09:58
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小橘子2013 at 2015-06-08 21:09:58
我是想问 每个大小的杯子都有自己的容量吧  电转的话是都要装满吗  如果感受态和质粒不够的话  需要用什么补齐吗  山梨醇可以吗...

一般我们不会装满，装200微升就够了。。。。没必要装满，至于质粒，一般体积控制在5微升和酵母混合。。。感受态细胞多少其实不太重要，多点也没关系。酵母很好转

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4楼2015-06-08 21:17:52
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