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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA提取电泳图，不知道什么原因。求原因
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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
308047410: 金币+2, ★有帮助 2015-06-10 23:42:35
跑胶的电泳液以及胶 都最好用DEPC来配置溶解。
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11楼2015-06-10 11:20:30
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MrFat

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
308047410: 金币+2, ★有帮助 2015-06-10 23:43:00
哎～步骤错了～
第4）步，上清中含有RNA，中间层和下层是多糖，蛋白和DNA～所以，你已经把RNA都扔掉了～提到的东西估计是DNA吧～
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12楼2015-06-10 19:28:51
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308047410

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by MrFat at 2015-06-10 19:28:51
哎～步骤错了～
第4）步，上清中含有RNA，中间层和下层是多糖，蛋白和DNA～所以，你已经把RNA都扔掉了～提到的东西估计是DNA吧～

步骤写错了，我留的是上清液～最近几天也提了一下，结果还是不好，你们一般用什么样的方法提取RNA呀～

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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13楼2015-06-10 23:41:51
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樊华易逝

铁虫 (小有名气)
从以下几方面看看。1、是否低温（比如酒精等是否遇冷）2、RNA降解酶来源（不用Trizo后注意，手套勤换，超净台）3、提取成功，跑胶时降解（跑胶液新置，时间不能太长）

[ 发自小木虫客户端 ]
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14楼2015-06-11 06:28:07
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308047410

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xiaoyangren7 at 2015-06-10 08:50:44
取事先预热 DEPC-H2O？要预冷的DEPC水吧，建议整个过程冰上操作，天气热的情况下，室温晾干那一步要注意，久了RNA就降解了，样品多来不及可以把晾干的先全部加了水再慢慢混匀

你们一般晾干多久？我一般是晾干 5分钟左右，里面还有乙醇 的之后能往里头加水吗？我看书上说55度预热的DEPC水有助于RNA溶解，我也不知道对不对。请指点，谢谢
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15楼2015-06-11 10:01:09
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308047410

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lichj at 2015-06-09 18:56:04
从胶图上看你的RNA已经严重降解了。最下面那团很亮的应该就是降解的碎片，另外电泳时间有些短，至少应该等marker条带分开以后再照相。电泳前应该先测一下OD值，通常上样量100-200ng就足够了，上样量过多有时条带反而 ...

还想问一下，OD怎么测，我们实验室有紫外分光光度计，是把提出来的RNA放到比色皿里面进行吸光值 的测定吗？电泳加2微升的样品算不算多呀？
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16楼2015-06-11 10:04:55
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xiaoyangren7

金虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 308047410 at 2015-06-11 10:01:09
你们一般晾干多久？我一般是晾干 5分钟左右，里面还有乙醇 的之后能往里头加水吗？我看书上说55度预热的DEPC水有助于RNA溶解，我也不知道对不对。请指点，谢谢...

5min差不多，DEPC水一般预冷用的，乙醇离心完可以先吸掉，这样干的快
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17楼2015-06-11 16:42:07
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