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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
308047410: 金币+2, 有帮助 2015-06-10 23:42:35
跑胶的电泳液以及胶 都最好用DEPC来配置溶解。
11楼2015-06-10 11:20:30
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MrFat

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
308047410: 金币+2, 有帮助 2015-06-10 23:43:00
哎~步骤错了~
第4)步,上清中含有RNA,中间层和下层是多糖,蛋白和DNA~所以,你已经把RNA都扔掉了~提到的东西估计是DNA吧~
12楼2015-06-10 19:28:51
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308047410

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by MrFat at 2015-06-10 19:28:51
哎~步骤错了~
第4)步,上清中含有RNA,中间层和下层是多糖,蛋白和DNA~所以,你已经把RNA都扔掉了~提到的东西估计是DNA吧~

步骤写错了,我留的是上清液~最近几天也提了一下,结果还是不好,你们一般用什么样的方法提取RNA呀~

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
13楼2015-06-10 23:41:51
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樊华易逝

铁虫 (小有名气)

从以下几方面看看。1、是否低温(比如酒精等是否遇冷)2、RNA降解酶来源(不用Trizo后注意,手套勤换,超净台)3、提取成功,跑胶时降解(跑胶液新置,时间不能太长)

[ 发自小木虫客户端 ]
14楼2015-06-11 06:28:07
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308047410

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by xiaoyangren7 at 2015-06-10 08:50:44
取事先预热 DEPC-H2O?要预冷的DEPC水吧,建议整个过程冰上操作,天气热的情况下,室温晾干那一步要注意,久了RNA就降解了,样品多来不及可以把晾干的先全部加了水再慢慢混匀

你们一般晾干多久?我一般是晾干 5分钟左右,里面还有乙醇 的之后能往里头加水吗?我看书上说55度预热的DEPC水有助于RNA溶解,我也不知道对不对。请指点,谢谢
15楼2015-06-11 10:01:09
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308047410

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by lichj at 2015-06-09 18:56:04
从胶图上看你的RNA已经严重降解了。最下面那团很亮的应该就是降解的碎片,另外电泳时间有些短,至少应该等marker条带分开以后再照相。电泳前应该先测一下OD值,通常上样量100-200ng就足够了,上样量过多有时条带反而 ...

还想问一下,OD怎么测,我们实验室有紫外分光光度计,是把提出来的RNA放到比色皿里面进行吸光值 的测定吗?电泳加2微升的样品算不算多呀?
16楼2015-06-11 10:04:55
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xiaoyangren7

金虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 308047410 at 2015-06-11 10:01:09
你们一般晾干多久?我一般是晾干 5分钟左右,里面还有乙醇 的之后能往里头加水吗?我看书上说55度预热的DEPC水有助于RNA溶解,我也不知道对不对。请指点,谢谢...

5min差不多,DEPC水一般预冷用的,乙醇离心完可以先吸掉,这样干的快
17楼2015-06-11 16:42:07
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