24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 720  |  回复: 8
当前主题已经存档。

足下客

木虫 (正式写手)

[交流] 请教关于构建质粒载体的问题

我要构建一个新的穿梭质粒。扩增出我需要的目的基因片段后,再插入到pUC18的多克隆位点中。请问插入外源基因片段时,有正反方向之分吗?反向插入和正向插入有什么区别呢?
PS:我不是做的表达载体,外源基因片段是一个内源性质粒中编码质粒稳定蛋白和复制起始蛋白的基因
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人

应该没有吧!
细推物理须行乐。
2楼2008-07-23 14:39:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

足下客

木虫 (正式写手)

如果正向插入会不会导致多克隆位点上游的lac启动子发挥作用,然后使蛋白过量表达,影响菌的生长啊?
3楼2008-07-23 18:01:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pph0259

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
给你一个比较正确的回答:
你的外源基因片段是一个内源性质粒中编码质粒稳定蛋白和复制起始蛋白的基因,请问这个基因是自带启动子吗?如果是的话,正反插入一般没有太大的影响,但有一定的影响,就是你担心的那个问题。所以最好反向插入,避开lac启动子。
4楼2008-07-23 19:25:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvpeng_ujs

新虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
如果你是用的双酶切连进PUC载体的的话就不用考虑方向问题。
5楼2008-07-23 20:11:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

足下客

木虫 (正式写手)

谢谢楼上的解答。我的基因不是自带启动子的
不过为什么用双酶切就不用考虑方向问题呀?
6楼2008-07-24 21:35:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

因为双酶切,一般选用切出的黏性末端不一样的酶
所以到时候插入方向就是固定的,什么黏性末端就接到对应的一端
7楼2008-07-24 23:36:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pph0259

木虫 (正式写手)

不知道6楼的回答LZ明白没有,我补充一句,就是双酶切可以控制插入的方向
8楼2008-07-24 23:51:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seraph1943

金虫 (小有名气)

双酶切 自己画个图就明白了
重剑无锋
9楼2008-07-27 15:05:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 足下客 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 291求调剂 +6 HanBeiNingZC 2026-03-24 6/300 2026-03-28 07:55 by baoball
[考研] 085404求调剂,总分309,本科经历较为丰富 +4 来财aa 2026-03-25 4/200 2026-03-28 07:41 by 棒棒球手
[考研] 315分求调剂 +7 26考研上岸版26 2026-03-26 7/350 2026-03-28 04:05 by fmesaito
[考研] 291求调剂 +7 孅華 2026-03-22 7/350 2026-03-28 04:02 by fmesaito
[考研] 085701环境工程求调剂 +9 多久上课 2026-03-27 9/450 2026-03-28 03:58 by fmesaito
[考研] 330一志愿中国海洋大学 化学工程 085602 有读博意愿 求调剂 +3 wywy.. 2026-03-27 4/200 2026-03-28 03:32 by fmesaito
[考研] 266分求材料化工冶金矿业等专业的调剂 +4 哇呼哼呼哼 2026-03-26 4/200 2026-03-27 17:02 by zhyzzh
[考研] 283求调剂(080500) +4 A child 2026-03-27 4/200 2026-03-27 15:34 by XPU李庆
[考研] 化学308分求调剂 +8 你好明天你好 2026-03-23 9/450 2026-03-27 14:01 by 杨光于青云
[考研] 317求调剂 +5 十闲wx 2026-03-24 5/250 2026-03-27 13:48 by 杨杨杨紫
[考研] 317求调剂 +7 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 7/350 2026-03-27 02:29 by fmesaito
[考研] 342求调剂 +3 加油a李zs 2026-03-26 3/150 2026-03-27 00:29 by wxiongid
[考研] 324求调剂 +4 wysyjs25 2026-03-21 4/200 2026-03-26 20:38 by fmesaito
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:57 by nihaoar
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
信息提示
请填处理意见