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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白质荧光
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361941517

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质荧光 已有2人参与

本人最近在做蛋白质荧光方面的实验，请问用酶标仪280nm下对同一蛋白溶液进行连续多次激发，会破坏蛋白结构吗？连续测定时荧光强度差别很大是什么原因。在线等。。。
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1楼 2015-06-04 16:49:48
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sdhxwp

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
361941517: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-06-06 08:09:41
要破坏结构需要很高光强的，基本不可能。信号不重复可能是因为吸附，或温度没恒定有关吧。可以加点tween防吸附。温度最好恒定，荧光对温度很敏感

[ 发自小木虫客户端 ]
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卧看满天云不动，一抹长风万里空。
2楼2015-06-04 17:59:09
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
361941517: 金币+2, ★有帮助 2015-06-06 08:09:50
由于蛋白质中存在着含有共轭双键的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸，phe  257nm  tyr 275 nm,trp 280 nm，由于色氨酸的吸收峰最强，因此蛋白质溶液在280nm处具有紫外吸收高峰。
但是蛋白质中存在着含有共轭双键的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的各个吸收峰的强弱和一定程度上的波长变化，与每一个带有芳香环的氨基酸处在蛋白质的构像的分子环境和溶液环境都有关系。后两者发生了变化，蛋白质的吸收峰又会有变化，包括波长，因为phe  257nm  tyr 275 nm,trp 280 nm，三者的的强弱会由于三种氨基酸的具体的分子环境而不同，导致三种吸收峰的叠加波长也有所不同。
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3楼2015-06-05 08:47:43
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